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質量分析向きの界面活性剤 トピック削除
No.575-TOPIC - 2011/06/24 (金) 19:47:38 - ぴゅーらむ
表題の通りなのですが、LC−MS/MSで精製してきたタンパク質を同定しようとしているのですが、質量分析向きの界面活性剤は何がよいでしょうか?
n-octylglucoside をよく目にするのですが、あまりにも値段が高いので・・・。
何かほかにありましたらよろしくお願いいたします。
 
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No.575-6 - 2011/06/28 (火) 09:17:49 - Kanata
”まだ”MS向き、です。クロマトグラムにはしっかり出てきてしまうので
厳密にはMSには優しくないのですが、CHAPSがペプチドの溶出後に溶出されるのでまだ許容範囲、といった界面活性剤です。

もし気になるのであればSCXカートリッジである程度は除去できますが、ご存知のようにTwitter ionなので完全除去はできません。

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No.575-5 - 2011/06/27 (月) 10:33:12 - ぴゅーらむ
kanata さん、コメントありがとうございました。
CHAPS がMS向きとは知りませんでした。
一回これでトライしてみようと思います。

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No.575-4 - 2011/06/25 (土) 19:21:58 - Kanata
どの界面活性剤を使っても、LC-MSに導入する前に除去できていればOKです。Sigma-aldrichからNP-40などの界面活性剤除去ゲルが出ていたのをみたことがあります。(その際にサンプルロスも起こりうるわけですが)

LCのカラムで界面活性剤を完全に除去できるわけではなく、PEG由来のピークががんがん出てきます。界面活性剤はペプチドとC18固定相の分離を妨害するようで、ひどいときは次のサンプル測定のときにようやく溶出される場合もあります。

NP40, Tween,Tritonを使わざるを得ない場合は前述の手法で界面活性剤を除去してもらうか、アセトンで除去する場合もあります。(これも100%ではありませんが)

おすすめはCHAPSです。これもどんなに頑張って除去してもカラムに残ってしまうのですが、溶出位置がペプチドと離れているので、まだMSに優しい界面活性剤です。お値段はやはり高めですが。

Nano-LC-MS/MSで測定するようでしたら、一層のクリーンアップが必要です。注入量は1-2マイクロリットルが一般的なので、クリーンアップ後にサンプルを濃縮する必要があります。90%の界面活性剤を除去することができても、1サンプルを10倍に濃縮すると高濃度で界面活性剤が存在することになるからです。

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No.575-3 - 2011/06/25 (土) 06:43:08 - ぴゅーらむ
おおさん、ありがとうございました。

すみません、説明不足でした。
In-solution でやろうと思っています(ゲルからの切り出しよりも効率がいいので)。

よろしくお願いします。

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No.575-2 - 2011/06/25 (土) 04:21:11 - おお
LCで何を使うかによりますがそこで抜ければ何でもいいのではないでしょうか。SDSPAGEでバンドをくり抜くならTRITONとか大抵のものはOKです。

質量分析向きの界面活性剤 削除/引用
No.575-1 - 2011/06/24 (金) 19:47:38 - ぴゅーらむ
表題の通りなのですが、LC−MS/MSで精製してきたタンパク質を同定しようとしているのですが、質量分析向きの界面活性剤は何がよいでしょうか?
n-octylglucoside をよく目にするのですが、あまりにも値段が高いので・・・。
何かほかにありましたらよろしくお願いいたします。

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