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ありがとうございます 削除/引用 No.57-10 - 2011/02/23 (水) 09:30:01 - S 皆さん、ありがとうございます。 とても参考になります。RLTを使う場合は、-80℃が良いようですね。QIAGENのキットを使う予定なので、RLTがそのまま次のステップに行けるので便利かなと思っております。

(無題) 削除/引用 No.57-9 - 2011/02/23 (水) 08:39:12 - RLT 昔、RLTに溶かして2日ほど-20度に入れておいたら全然RNAがとれなかった経験があります。 その時たまたま悪かったのか、温度のせいかわかりませんが… ちなみに、推奨の保存温度は-80度ですよね。

(無題) 削除/引用 No.57-8 - 2011/02/23 (水) 01:32:36 - TS RNAlaterを使うときには、細胞を破砕しちゃだめですよ。

RNAlaterは 削除/引用 No.57-7 - 2011/02/22 (火) 23:46:04 - ami2 RNAlaterは、硫安沈殿ベースの保存液である！！！ RLTとかTRIZol系は、グアニジン系の保存液兼抽出試薬である！！！

(無題) 削除/引用 No.57-6 - 2011/02/22 (火) 23:39:36 - チャウチャウ >RLTとRNAlaterって殆ど同じものだと思います。 >精製カラムに合わせてちょっと組成が違うくらいでしょう。 おいおいっ、ちっとも同じじゃないぞ。

(無題) 削除/引用 No.57-5 - 2011/02/22 (火) 23:05:39 - ンンノ RLTとRNAlaterって殆ど同じものだと思います。 精製カラムに合わせてちょっと組成が違うくらいでしょう。 どちらにしろ細胞を完全に溶かしておかないとRNAの保存性が落ちるようです。 RNeasy plusには界面活性剤の入ってるRLT plusというのが付属していて、 便利ですよ。

リアルタイムPCRくらいなら 削除/引用 No.57-4 - 2011/02/22 (火) 19:05:36 - ami2 RLTでしっかり溶解して、-80deg保存で問題になったことない。 たぶんRNAlaterでも全く問題ない。

(無題) 削除/引用 No.57-3 - 2011/02/22 (火) 19:01:42 - TS わたしはRNAlaterをおすすめします。 どのキットを使って抽出するか後から決めれますし、 説明書を見ればわかりますが、ディープフリーザーがなくても長期保存も可能ですから。短時間なら、室温も大丈夫だったと思います。

(無題) 削除/引用 No.57-2 - 2011/02/22 (火) 16:15:13 - 通りすがりの経験者 Total RNAの場合、ニッポンジーンのISOGEMを培養細胞に加え、23Gシリンジで破砕した後に-80℃に保存しています。 （プロトコール書籍の作成者の好みが自然と広がっただけでしょうが、細胞をやる人はISOGENを、組織をやる人はTRIZOLを好む傾向にある気もします） ２週間以内に精製して逆転写します。 逆転写前にアガロースゲル電気泳動（面倒なので普通の２％アガロースゲル/TAEバッファーです）でリボソームRNAでRNAの品質をチェックしますが問題は出ていません。

RNA抽出用サンプルの保存 削除/引用 No.57-1 - 2011/02/22 (火) 16:00:23 - S お教え下さい。 多くの種の培養細胞株から、リアルタイムPCRを行いたいため、Total RNA抽出を同時に行いたいと考えております。その為、得られた細胞のRNAを出来るだけ分解させず、好条件で保存したいと考えております。キアゲンのRLT溶液（多分グアニジン液だと思いますが）で細胞を溶かして、-80℃保存を考えておりますが、RNA laterも気になります。RLT溶液なら冷蔵or室温保存でも大丈夫とか、RNA laterの方が良いとか、経験等ありましたら是非お教え頂ければ助かります。 宜しくお願い致します。

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