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(無題) 削除/引用 No.568-6 - 2011/06/26 (日) 12:55:01 - おお プロメガはストップバッファーがついてきますね。あとはご自身の系でフェのクロを飛ばせるのか確認するのがいいのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.568-5 - 2011/06/24 (金) 05:05:03 - CA AmbionのTURBO DNA-freeというが安くて簡単なのでよく使ってます。 http://www.ambion.com/catalog/ProdGrp.html?fkProdGrp=309 310さんが言ってるのも、たぶんこのキットだと思います。

(無題) 削除/引用 No.568-4 - 2011/06/23 (木) 22:30:03 - 貧乏人 プロメガのRQ１、AmbionのDNase�TRNase Free双方とも、メーカー側のプロトコルにはフェノクロ・クロロホルム沈にてDNaseを取り除けと書かれていますので、今使っているニッポンジーンのものと使い方は変わらない気がしますが、いかがでしょうか。kodamaさんのフェノールを飛ばしの部分をもう少し教えていただくことはできますか？

(無題) 削除/引用 No.568-3 - 2011/06/23 (木) 21:57:08 - kodamataro ISOGEN→粗精製RNAを作成 →PromegaのRQ1-DNase（最終液量20μl)→フェノールをとばし、280μlのH2Oを加え、→クロロホルム300μl→酢酸ナトリウムを使うエタ沈（このとき、ナカライのグリコーゲンを5μl加える）→70%エタノールで洗い。 これでどうにかなっています。 純度を高めるコツは「中間層を採取しない」ことです。 不安な場合はISOGEN時にもグリコーゲンを使います。

(無題) 削除/引用 No.568-2 - 2011/06/23 (木) 21:31:26 - 310 キアゲンでDNase処理込みの逆転写キットが発売されていて使っていました。転写効率でそれまでに使っていたSuperscriptIIIにやや劣る気がしたので、使うのをやめてしまいましたが、gDNA除去としては簡便かつロスが少ないと思っています。 私も似た質問をして、ABIのDNaseを勧めていただきました。確か、DNaseがペレットに吸着されるので除くのが簡単だそうです。名前はど忘れしましたので識者のレスをお待ちいたします。

おすすめDNase 削除/引用 No.568-1 - 2011/06/23 (木) 21:17:56 - 貧乏人 こんにちは。いつもお世話になっています。 今までRNaseの抽出をキットで行っていたのですが、コスト削減のため、Trizolで抽出、DNase処理、フェノクロ沈、エタ沈と行っています。現在、微量RNAをできるだけロスなくこなしたいと考えています。普通に行うと、どうしてもステップが多く、20%ほどのRNAをロスしてしまいます。 ある会社の熱処理によるDNase失活できるものを検討したのですが、リアルタイムに持ち込むにはやはりフェノクロ沈しなければいけないと添付されており、なんじゃそれ、と思い他にいいのがないかを探しているのですが、一応フォーラムで聞いてみようと思いまして、投稿しました。 ただ、コスト削減のためなので、なるべく安価で、ステップが少なくなくてもいいので、ロスが少なさそうなDNaseをご存知の方はご一報いただければ幸いです。（プライマーにｷﾞｬｯﾌﾟを挟むとか以外で）

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