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サイクル数が多すぎるのでは 削除/引用 No.545-4 - 2011/06/17 (金) 09:37:31 - ~ >「発現している」 示したいのは何でしょうか？ 細胞1個あたり、1コピー以上のRNA分子があることでしょうか？ 何も気にせずにバンドを見せれば発現しているといえる結果であればよかったのですが、そのサイクル数ではそうはいかないと思います。 どのような条件でRT-PCRをやられているのかわかりませんが、細胞1個あたり何コピーのRNAがある計算になるのでしょうか？ そこまでサイクル数を増やさないと検出できないという結果は、ほとんど発現していないことを意味しているかもしれません。 たんぱく質ワークよりも核酸ワークが得意なラボなのでしょうか？ WBでも「さらっと」示すことは可能です。 もし、いいPCRのネガコンが用意できないようであれば、抗体を買ったほうが楽かもしれません。

(無題) 削除/引用 No.545-3 - 2011/06/17 (金) 06:23:59 - おお PCRでわかることは、そのmRNAが貴方の使った溶液の中に入っているという事です。それを言うにはまずネガコンがあれば、そこまではいえます。 ただそれがバイオロジカルに発現しているということなのかというと若干トリッキーと思います。 その遺伝子が発現してないと報告のある細胞で比較を行えば若干真実味がますかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.545-2 - 2011/06/16 (木) 22:25:56 - み 36-38サイクルで出たバンドが本当にその遺伝子のcDNAなのかをチェックすべきだと思います。 あとはその微少と思われる発現でも有意な発現であることを証明すれば良いでしょう。 特異抗体でタンパク発現が検出できればなお安心でしょうが、その先に、何をどう証明するかでタンパクを見る必要性は変わってきますよね。

「この細胞でこの遺伝子は発現している」の示し方 削除/引用 No.545-1 - 2011/06/16 (木) 21:34:29 - rumina いつも興味深く皆様のやりとりを拝見させて頂いております。 初歩的な質問ですが、ご相談に乗って頂ければ幸いです。 遺伝子の発現量の差を見る場合、現在ではリアルタイムPCRが手軽で、世間でも認められた方法であるように思われます。 色々な種類の細胞間で、この細胞にはAという遺伝子は発現しているがBという遺伝子は発現していない、、、、とか、別の細胞にはAは発現していないがBには発現している、、、、のようなことを示す場合、PCR（RT）によって、バンドでてる→発現してる、バンド出てない→発現してない、といった形で「その細胞における遺伝子の」発現を見ている報告も多いと思います。 現在私の扱っている細胞において、とある遺伝子Zが、遺伝子あるいはタンパクとして発現しているという報告はまだないのですが、その発現を示すことが私の研究の目的ではありません。なのでさらっと「発現している」ことだけを示すにとどめたいのですが、その方法としてRTで大丈夫だろうか？と思っております。 実際RTにてその発現が３６〜３８サイクル程で確認できました。 皆様ご意見アドバイスのほどよろしくお願い致します。

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