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(無題) 削除/引用 No.516-4 - 2011/06/13 (月) 22:23:19 - おお 分泌型は確かにタイムコースを取るのに便利そうですね。実験によるでしょうけど細胞内がたのルシフェラーゼの半減きは細胞のその時のレポーター活性を反映出来るように短めに考慮されていると思います。分泌されたものはそうでもないかも知れません。確かに必要な時間のフレームでバイチを交換すればいいのかもしれませんが。そのへんをよく見比べてみる事も必要かもしれません。分泌、輸送に関わるタンパクの発言が大きく変わるようなら問題があるかもしれません。 分泌型出なくてもウェルのバイチを除きそれにライシスバッファー、ルシフェリンを加え測定できますので、どちらが操作が楽ともいえないです。

ありがとうございます 削除/引用 No.516-3 - 2011/06/13 (月) 17:44:55 - sima ありがとうございます。 理解できました。

(無題) 削除/引用 No.516-2 - 2011/06/13 (月) 09:21:50 - FL 元々は細胞内に発現したルシフェラーゼを細胞リシスして測定するものです。ルシフェラーゼアッセイといえばこの方法が一般的です。 その後、分泌型のルシフェラーゼが開発され、リシスせずとも培地中のルシフェラーゼを測定できるため、経時的なタイムコースを取ることが便利になったのだと思います。 正確には知りませんが、細胞内型の方が感度が高いのではないでしょうか？分泌方はタイムコースを取りやすいですが、濃度が薄くなってしまうのではないでしょうか？

レポーターアッセイ 削除/引用 No.516-1 - 2011/06/11 (土) 18:36:52 - sima ヒト培養細胞に、プラスミドベクターを用いて、目的遺伝子のプロモーターとルシフェラーゼの遺伝子導入し、ルシフェリンを投与して、発現を確認するレポーターアッセイをやっています。 ルシフェリン投与して発現を確認するのに、培養細胞を生きたままで、ルシフェリンを投与する方法と、細胞をつぶして、ルシフェリンを投与する方法があるようなのですが、どちらの方法がよりよいのか、通常はどのようにやられているのか、ご教授いただけないでしょうか。 どうぞよろしくお願いします。

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