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細胞あたりのRNA量について トピック削除
No.500-TOPIC - 2011/06/09 (木) 12:24:32 - re
どなたかご存じの方、教えて下さい。

細胞からtotal RNAを抽出し、QPCRを行っています。
癌細胞のRNA含有量は、細胞100万個あたり10〜30μg程度と、多くの記載があります。今回、マウス腸管のT細胞よりRNAを抽出したいのですが、このRNA含有量は、これよりだいぶ少ないと聞いたのですが、およそどれくらいなのでしょうか。

またRNAからcDNAにしたい時、現在使用しているkitは1000ng以上のRNAしか適用がない様なのですが、これより少ないRNAをcDNAにするには、どうすればいいのでしょうか。
 
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(無題) 削除/引用
No.500-2 - 2011/06/11 (土) 12:05:15 - 310
私は使ったことはありませんが、少量のRNA用にQIAGENからcDNA合成キットが販売されています。
http://www.qiagen.com/Products/Pcr/QiagenReverseTranscriptases/SensiScriptRT.aspx?pf=1

正しい使い方ではありませんが、私はRNA濃度を上げて反応スケールを落とすことは良くやります。(RNA1000ng/20ulの反応系を、500ng/10ulとする。)

腸管のT細胞はRNAをとったことがないので分かりません。

逆に質問ですが、腸管のT細胞をどのように単離されるのでしょうか?

細胞あたりのRNA量について 削除/引用
No.500-1 - 2011/06/09 (木) 12:24:32 - re
どなたかご存じの方、教えて下さい。

細胞からtotal RNAを抽出し、QPCRを行っています。
癌細胞のRNA含有量は、細胞100万個あたり10〜30μg程度と、多くの記載があります。今回、マウス腸管のT細胞よりRNAを抽出したいのですが、このRNA含有量は、これよりだいぶ少ないと聞いたのですが、およそどれくらいなのでしょうか。

またRNAからcDNAにしたい時、現在使用しているkitは1000ng以上のRNAしか適用がない様なのですが、これより少ないRNAをcDNAにするには、どうすればいいのでしょうか。

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