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(無題) 削除/引用 No.50-6 - 2011/02/21 (月) 20:52:35 - まあ、 私も、Actiasと同じように、 >ゲル切り出しで断片の精製。 でして、 そのPCR産物をダイレクトシークエンスします。 特に、相同染色体上にある遺伝子ならば、 SNPも同時に解析しておいた方がいいですから。 もちろん、シークエンスが得られたら、 クローニングベクターに入れて、プラスミドにし、 SNPがあったならば、どれを使うかSNPの部分だけ再度シークエンスにかけて、 次の実験に使います。

訂正 削除/引用 No.50-5 - 2011/02/21 (月) 14:28:50 - ~ Tベクターに入れるために切り出すので、 ダイレクトシークエンシングするのであれば、ExoSapItは使わずにライゲーションに使った残りで読むことになると思います。

(無題) 削除/引用 No.50-4 - 2011/02/21 (月) 10:11:57 - ~ 前提として、あたりの断片を何に使いたいのかの目的がないと、取るべき手法が決まらないと思いますけど。 私ならその断片をいつでも得られるようにTベクターに入れてから読みます。 予算と労働力に余裕があれば、平行してダイレクトシークエンシングもするかもしれません。 ただ、あくまで完全にはずれの際に、得られたコロニーを読む労力を飛ばすためです。 切り出すための時間はおそらくかけません。 それで読めなくても翌日の朝からコロニーPCR→ダイレクトシークエンシングで、2日後の朝には中身が分かりますし。

(無題) 削除/引用 No.50-3 - 2011/02/20 (日) 20:55:20 - Actias ゲル切り出しで断片の精製。

シングルバンドなら 削除/引用 No.50-2 - 2011/02/20 (日) 20:37:21 - ami2 ダイレクトシーケンスします。前のほうちょっと読めなくてもいいなら。

シーケンスについて 削除/引用 No.50-1 - 2011/02/20 (日) 19:06:23 - yuki ある遺伝子について、ゲノムPCRによりシングルバンドのPCR産物（産物量は十分ある）が得られた。 この産物の塩基配列を決定するとき、このあとどのような方法で皆さんはシーケンスサンプルを準備しますか？

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