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Flow Cytometryでの蛍光抗体標識での染色効率の算出
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No.499-TOPIC - 2011/06/09 (木) 12:00:20 - のらり
Flow Cytometryでの蛍光抗体標識での染色効率の算出はどのようにするのでしょうか?
具体的には、ある集団は80-100%くらいポジティブのはずなのですが、ある蛍光抗体がネガティブの集団に対しても反応してしまうため、結合条件を厳しくしました。そうしますと、今度は、80-100%くらいポジティブのはずの集団がのラベリングが40%くらいに落ちてしまいました。その蛍光抗体はかなり良い抗体のような気がするのですが、のらりくらりと遊ばれているような気がします。
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No.499-4 - 2011/06/10 (金) 09:41:28 - f
もう一度トライです。Flow Cytometryを使った事がありませんので、適当です。
++,+-,-+,--みたいな感じで集団が出ているけど、十字を書いて分けるとグラフに対して十字が斜めになってるみたいなイメージでしょうか?
二重染色なので蛍光間で干渉していて、++の集団のシッポが長くなって、-方向に少し寄ってる
なんてことは、Flow Cytometryでは考えなくてもいいんでしょうか?
効率の算出を何に使うのか分かりませんが、もし仮に上記のような可能性がある場合、Flow Cytometryでは効率を算出できない、とも言える気がします。
適当ですいません。
(無題)
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No.499-3 - 2011/06/10 (金) 07:38:46 - のらり
実はダブル染色で、ある位置にある集団はその蛍光抗体標識が〜100%「ネガティブ」でなければなりません。
これは、知る限りすべての多くの論文でそうであり、理論的にもそれが予測されます。
よって、その集団が〜100%「ネガティブ」になるように条件を逆に設定しなければならないのです。
(無題)
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No.499-2 - 2011/06/10 (金) 06:23:15 - f
よく理解していないまま書きます。ごめんなさい。
>ある集団は80-100%くらいポジティブのはず
と言う自信があるのならば、
「ネガティブ」と言う名前の集団も40%くらい?ポジティブと考えてはダメなのですか?
Flow Cytometryでの蛍光抗体標識での染色効率の算出
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No.499-1 - 2011/06/09 (木) 12:00:20 - のらり
Flow Cytometryでの蛍光抗体標識での染色効率の算出はどのようにするのでしょうか?
具体的には、ある集団は80-100%くらいポジティブのはずなのですが、ある蛍光抗体がネガティブの集団に対しても反応してしまうため、結合条件を厳しくしました。そうしますと、今度は、80-100%くらいポジティブのはずの集団がのラベリングが40%くらいに落ちてしまいました。その蛍光抗体はかなり良い抗体のような気がするのですが、のらりくらりと遊ばれているような気がします。
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