全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用 No.491-3 - 2011/06/07 (火) 21:55:12 - うえお おおさん、早々にご解答いただきありがとうございます。 いま、ーadeーhisーtrpーleu、xalphaーgal、AbAのプレートを準備しています。 ーadeでは最小培地で赤く色つくと思います。得られたコロニーのうち 半分くらいの大きなコロニーは赤くならず白いままですので、 ご助言を考え、こういうコロニーを中心に2ndスクリーニングを行ってみようかと 思います。 引き続きご経験者の方などからご意見いただければと思います。 よろしくお願いします。

(無題) 削除/引用 No.491-2 - 2011/06/07 (火) 19:48:30 - おお 中にはフォールすポジティブをの物もあると思いますが、X-alpha-Galは比較的感度が低いです。とりあえずプライオリティーをつけるなら発色した2つはまず解析にまわして、残りのクローンは少し強いストリンジェンシー(たのマーカーを加える)に持っていってもいいかもしれません。生えたものすべて解析に回すという力業が可能ならそうでもいいかもしれません。 待てば発色するものもあると思いますが、１次スクリーニングで発色させることが目的というわけでもありませんので、それをふまえて次のステップを考えてみてはどうでしょうか。コロニーをストリークして増やすと、ポピュレーションがちがう(シングルから生えたわけではない)のでそこで発色が確認できる場合もあると思います。 -ade, -hisなどが使えると思います。-his/3ーATでストリンジェンシーを振ってもいいかもしれません。 発色のマーカーはx-beta-galの活性をコロニーレプリカをフィルターに移してから見る方法が一番感度がいいです(ただお使いのシステムにbeta-galの活性が乗っているかは分かりませんけど)。

Y2H-matchmaker gold 削除/引用 No.491-1 - 2011/06/07 (火) 17:42:49 - うえお matchmaker goldの1st screeningをしています。 1stは、AbA 100ng/mlとX-alpha-Galでscreeningです。 一応コロニーはでてきているのですが、X-alpha-Galの分解産物で 青くなっているコロニーは、二つしかありません。 スクリーニングされたコロニー数は、10^7以上、今生えてきているコロニーは、 全部で数千コロニーくらいかなと思います。 30℃培養期間は5日目。とりあえずあと数日培養しようと思います。 baitによるのでしょうが、mellによる呈色反応って、5日培養で すでに充分なのでしょうか？まだ培養を続ける価値はあるのでしょうか？

全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を

チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する 名前  メール  　アドレス非公開    タイトル  本文       設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます） 上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません） 解決（問題が解決した際にチェックしてください） 暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。 送信

---

〔使い方〕 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。

---