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imaging plate の蓄積潜像 トピック削除
No.489-TOPIC - 2011/06/06 (月) 19:17:26 - mi
最近RI標識プローブでノーザンをやっています。

ハイブリさせた後、最後はimaging plate などに挟んで検出すると思いますが、
この時、皆さんはどのくらい挟んでおくでしょうか?

当然、メンブレンのカウントや核種によると思うのですが、
今私が試みているのは、とっても低発現な内在のRNA を32Pラベルプローブで検出しようとしています。
洗い終わった最後のメンブレンのカウントが150cpm 位です。
いつも3日くらい適当に挟んで検出していたんですが、32Pがかなり減衰してきて(6週間)、いつ検出しようか悩んでます。

皆さんはどんな感じで、日数を決めてますか?
 
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(無題) 削除/引用
No.489-5 - 2011/07/30 (土) 16:36:36 - おお
Pは私もフレッシュな方がいいと思います。半減きがきたあたりで次の購入を考え実験計画をたてます。
半減きのうえに、放射活性により分子がダメージを受けますので、いろんな意味でうまく行かなくなってきます。

検出はまあO/Nぐらいまでが私の場合は大抵ですが、実験によっては見えれば(もちろんちゃんと検出できていることが前提で)OKと言う実験もあるでしょうし長期やっても良いでしょうけど。私の場合は1日でちゃんとも見れないものは長期でやってもそんなに改善されないことが多いです。勿論長期で見れている場合の実験があるならそれは否定いたしません。

RIの方を 削除/引用
No.489-4 - 2011/07/29 (金) 10:00:24 - ema
うーん私はPを買い直す、です。
だいたい2回半減期(14day*2)でシリアスな実験はやめようって決めてます。
検出時間は48−72hr、面倒なら1週間ほどほっときます。

VTAVioDxOWXNn 削除/引用
No.489-3 - 2011/07/28 (木) 23:53:34 - rnwurp
Bc0fx7 <a href="http://quyfndbqoxys.com/">quyfndbqoxys</a>

sxRjeDuS 削除/引用
No.489-2 - 2011/07/28 (木) 19:27:48 - Carajean
I can't believe you're not planyig with me--that was so helpful.

imaging plate の蓄積潜像 削除/引用
No.489-1 - 2011/06/06 (月) 19:17:26 - mi
最近RI標識プローブでノーザンをやっています。

ハイブリさせた後、最後はimaging plate などに挟んで検出すると思いますが、
この時、皆さんはどのくらい挟んでおくでしょうか?

当然、メンブレンのカウントや核種によると思うのですが、
今私が試みているのは、とっても低発現な内在のRNA を32Pラベルプローブで検出しようとしています。
洗い終わった最後のメンブレンのカウントが150cpm 位です。
いつも3日くらい適当に挟んで検出していたんですが、32Pがかなり減衰してきて(6週間)、いつ検出しようか悩んでます。

皆さんはどんな感じで、日数を決めてますか?

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