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(無題) 削除/引用 No.484-5 - 2011/06/06 (月) 10:55:25 - 初心者 ありがとうございます。 確認してみます。

(無題) 削除/引用 No.484-4 - 2011/06/06 (月) 03:37:51 - おお >[Re:3] 初心者さんは書きました : > PB-SB-βASA-pA-pA-Gr1.4LTR-SD-En2SA-SB-PBがこの方向で入った場合、LTRの後ろについているSD-En2SAは特に必要ないような気がしますが、、、 LTRをプロモーターとして使っているのでしたらLTRからのトランスクリブトの安定、核外輸送の促進を狙ってるんでしょうね。 > > pAはBidirectionalと書いていたので逆に入ることも想定して作っているみたいなんです。 逆に読まれるとSAやSDは機能しないと思います。ただし遺伝子と逆方向にGr1.4LTR-SD-En2SA-SB-PB(コンストラクト上では順方向)が読まれると思います。何れにしろスキップする可能性はあるにしろ、pAが逆方向でも働くならそこで転写をストップさせることは考えているのでしょうね。 いちおう書かれていることからの勝手なよそうなので何がしかの確認をしてみてください。

(無題) 削除/引用 No.484-3 - 2011/06/05 (日) 17:50:00 - 初心者 おお様、有難うございます。 なるほど、スキップを避けるためSAが入っているのですね。 PB-SB-βASA-pA-pA-Gr1.4LTR-SD-En2SA-SB-PBがこの方向で入った場合、LTRの後ろについているSD-En2SAは特に必要ないような気がしますが、、、 pAはBidirectionalと書いていたので逆に入ることも想定して作っているみたいなんです。 逆に入った場合、SDとβASA間でLTRはスキップされてしますか？ と、すれば順方向に入った場合はLTRにより下流の遺伝子発現を亢進し、逆方向に入った場合は影響をあたえない、と解釈できるようなきがするのですが、いかがでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.484-2 - 2011/06/05 (日) 14:50:27 - おお >[Re:1] 初心者さんは書きました : > トランスポゾンの論文を読んでいてその構造の意味がよく理解できません。 > > PB-SB-βASA-pA-pA-Gr1.4LTR-SD-En2SA-SB-PB > > PB;Piggy Bac SB;Sleeping Beauty > βASA;Carp β-actin splice acceptor > pA;adenovirus polyadenylation signal > Gr1。4LTR;Graffi1.4 virus LTR > SD;Lun splice donor > En2SA;Engrailed2 splice acceptor > > トランスポゾンの間にこれらを入れることで挿入された部位の遺伝子の発現を亢進もしくは欠失させることができるらいいのですが、これらの要素がどのように働いて機能するのか理解できません。 > > よろしくお願いします。 これジーントラップのようなきがしますがどうなんでしょうか。。。 βASAがまず頭の方にありますよね。これはある遺伝子の中程にこのコンストラクトが挿入されたとして、イントロンが大部分をしめるマンマルとかイントロンに挿入される可能性が非常に高いです。で上流から転写が開始されて挿入された部分に至るわけですから、イントロンにある場合スプライシングアクセプターを入れておくと上流のスプライシングドナーとでスプライシングが起こるのを期待しています。ここにアクセプターがないと挿入されたコンストラクトはイントロンごとスキップされてしまうので何の意味もありません。 その下流のpAシグナルを2こもってきています。これはそこでポリAテイルを付け強制的にトランスクリプしょん終了させるためです。万全をきして2個なれべてそこでストップしないでスルーする頻度をなるべく抑えているのだと思います。 Gr1。4LTRは詳しく調べてませんが、レトロなどLTRはプロモーター活性を持っていますので下流に何かマーカーを発現させることを考えているかもしれません。さらに下流にポリAを置いてないのが気になりなすがエンドの物を使うということかもともおもえます。

トランスポゾン 削除/引用 No.484-1 - 2011/06/05 (日) 00:06:37 - 初心者 トランスポゾンの論文を読んでいてその構造の意味がよく理解できません。 PB-SB-βASA-pA-pA-Gr1.4LTR-SD-En2SA-SB-PB PB;Piggy Bac SB;Sleeping Beauty βASA;Carp β-actin splice acceptor pA;adenovirus polyadenylation signal Gr1.4LTR;Graffi1.4 virus LTR SD;Lun splice donor En2SA;Engrailed2 splice acceptor トランスポゾンの間にこれらを入れることで挿入された部位の遺伝子の発現を亢進もしくは欠失させることができるらいいのですが、これらの要素がどのように働いて機能するのか理解できません。 よろしくお願いします。

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