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(無題) 削除/引用 No.449-7 - 2011/05/30 (月) 03:18:35 - kuwa 返事が遅れてしまい申し訳ありませんでした。 >ab　さん いくつかのDNA抽出方法を使用して得た、DNAを使っています。PCR効率が確かに抽出方法に依存しているように思えます。逆にPCR効率から、どの抽出方法が良かったのか言えるような気もしてきました。何か、参考文献お持ちでしたら、教えてください。 >Boston-Pullman　さん 過去の論文で、すでに、特異性が確認されているプライマーとプローブを使用しています。 >ンンノ　さん 興味深い見解をありがとうございます。こちらも参考文献等を上げていただけると幸いです。 みなさんご意見ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.449-6 - 2011/05/27 (金) 10:41:15 - ンンノ 濃度の低いDNA溶液は希釈過程でチューブやチップに吸着して、希釈率よりも 実際の濃度が低くなります。 これを標準点として使うと見かけ上１００％を超えうると思います。 ｃＤＮＡ試料溶液ではｃＤＮＡ合成反応液にPCR反応の阻害効果が若干ある ので、持ち込み割合が多い試料ではCtが小さめにでることがあって、これも 見かけ上の増幅効率が１００％を超える原因になります。

(無題) 削除/引用 No.449-5 - 2011/05/27 (金) 06:57:53 - Boston-Pullman >[Re:3] kuwaさんは書きました : > サイバーグリーンでなくて、プローブを使用しているので、melting tempがみれません。 特異性はどのようにして確認されていますか？PCR でも WB でも特異性の確認は一番先にするべきことです。それなしでは、得られたデータに関して何も議論できないと思います。

(無題) 削除/引用 No.449-4 - 2011/05/27 (金) 06:49:53 - ab PCRを阻害する物質があると100%を越えるそうです。 理論的な事とかはよくわかりませんが、以前粗精製のDNAを使ったら150%を越えました。 ちなみに、検量線はきれいに描けます。

(無題) 削除/引用 No.449-3 - 2011/05/27 (金) 02:16:03 - kuwa サイバーグリーンでなくて、プローブを使用しているので、melting tempがみれません。

(無題) 削除/引用 No.449-2 - 2011/05/27 (金) 01:21:07 - Boston-Pullman 非特異的なバンドが増幅されている感じがします。melting temp はちゃんと確認されたでしょうか？

PCR効率　100%以上 削除/引用 No.449-1 - 2011/05/26 (木) 22:02:54 - kuwa real-time PCRを使用して、検量線を作成しているのですが、 PCR効率が100％以上になることがあります（100-120%程度）。 各DNA濃度でのCt値の誤差はほとんどなく正常だと思うのですが、 何が原因でPCR効率が100%を超えてしまうのかわかりません。 どなたかご存知の方がいらしたら、教えてください。 おねがいしまう。

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