Bio Technical フォーラム

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ビオチンの熱安定性 トピック削除
No.395-TOPIC - 2011/05/13 (金) 19:29:05 - XY
500 bp程度のDNA fragmentのビオチン化を行いたいと考えています。
各社のDNA oligo (primer)合成サービスに5'ビオチン化がありますが、5'ビオチン化したprimerを用いてPCRをかけた場合、できあがったPCR productもビオチン化されていると考えて良いでしょうか。それとも、PCR反応中の高温などで「はずれる」あるいは「不活性化(アビジンと結合しなくなる)」されてしまうでしょうか。
 
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トレーサーの件で 削除/引用
No.395-4 - 2011/08/04 (木) 11:58:47 - にわか神経解剖学徒
投稿の誤ってしてしまいました。どうも申し訳ありません。

ビオシチン系の神経トレーサーの検出 削除/引用
No.395-3 - 2011/08/04 (木) 11:56:13 - にわか神経解剖学徒
はじめまして。
ビオシチン系の神経トレーサーの検出に関してパラフィン切片でも対応できるるのかお尋ねします。(パラホルムアルデヒド-グルタルアルデヒド固定後のパラフィン包埋試料)
ビオシチンやデキストラン結合型のビオシチンなどのトレーサーを検出するプロとコールでは、たいていクリオスタットかビブラトームの使用を推奨しています。
実験室のクリオスタットが故障し、凍結切片を当分の間、作製できなくなりました。9月末までに何とか結果を出さねばならないので大変焦っています。
どうかご存知の方はお知らせ願えないでしょうか。

(無題) 削除/引用
No.395-2 - 2011/05/18 (水) 19:28:05 - ~
http://ja.invitrogen.com/site/jp/ja/home/brands/Dynal/Streptavidin-Coupled-Dynabeads/Capture-of-Biotinylated-Targets.html
http://wk.veritastk.co.jp/pdf/noteno9.pdf
少なくともPCR産物の精製にストレプトアビジンビーズが使えるようですね。

外れる率はわかりませんが、この精製方法を使えば標識されたフラグメントは回収できるのではないでしょうか。

ビオチンの熱安定性 削除/引用
No.395-1 - 2011/05/13 (金) 19:29:05 - XY
500 bp程度のDNA fragmentのビオチン化を行いたいと考えています。
各社のDNA oligo (primer)合成サービスに5'ビオチン化がありますが、5'ビオチン化したprimerを用いてPCRをかけた場合、できあがったPCR productもビオチン化されていると考えて良いでしょうか。それとも、PCR反応中の高温などで「はずれる」あるいは「不活性化(アビジンと結合しなくなる)」されてしまうでしょうか。

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