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回答ありがとうございます 削除/引用 No.383-3 - 2011/05/11 (水) 17:24:55 - KT > メタノールはきちんと全体に染み込んでいますか？ > それが問題ないのでしたら、抜け落ちるのは気泡が生じたためだと思います。 一度失敗してからはキチンと染み込ませています。気泡だけが原因だとすると、小さい泡粒のようにまばらに抜けるところが生じると思うのですが、レーン全体の1/3がごっそり抜け落ちてしまうこともあるのです。 > 抜けていないのであれば、ゲルを置く前、置いた後にもう少しトランスファーバッファーを垂らしてはいかがでしょうか。 アドバイスいただいた通りやってみます。 ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.383-2 - 2011/05/11 (水) 17:15:24 - ~ >ある部分だけごっそり抜け落ちたり メタノールはきちんと全体に染み込んでいますか？ それが問題ないのでしたら、抜け落ちるのは気泡が生じたためだと思います。 >その上から両手で優しく押さえて空気抜きをし このときにきちんと空気は抜けていますか？ 抜けているのであれば、その後に気泡が出来るのは脱気不足ではないでしょうか。 抜けていないのであれば、ゲルを置く前、置いた後にもう少しトランスファーバッファーを垂らしてはいかがでしょうか。

トランスファーがきれいにできません 削除/引用 No.383-1 - 2011/05/11 (水) 16:35:39 - KT ウエスタンを始めて３ヶ月ほどの初心者です。 セミドライ方式でPVDFに転写しています。 PVDFはメタノールで１分→トランスファーバッファーで２０分。その後、5mmろ紙１枚→PVDF→ゲル→ろ紙の順に挟んで、その上から両手で優しく押さえて空気抜きをし、bio-radの器械で15V 60minほど転写しています。 きれいに転写される部分もあるのですが、ポンソーで確認すると、ある部分だけごっそり抜け落ちたり、気泡が残存していたりと全体としてなかなか奇麗になりません。 ウチのラボにはウエットの器械がなく、他に方法がありません。 ちなみに、同定したい蛋白の分子量は140kDほどのものです。 なにかコツなどがあれば教えていただけたら助かります。

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