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安定発現株の長期培養 トピック削除
No.369-TOPIC - 2011/05/07 (土) 14:49:01 - あ
基本的な質問です。。。

薬剤耐性で安定発現株を作っても、培養を続けると発現しなくなることがよくあると思いますが、発現が下がった細胞は、実際にはどういうものが多いのでしょう。ゲノムに組み込んだ発現カセットが抜けるのでしょうか。薬剤耐性は残っているので、部分的に削れるのでしょうか。それとも、転写とかとか翻訳とか発現に必要な分子の方が欠落した細胞が生まれてくるのでしょうか。どなたか調べたことありませんか。
CMVプロモーターの発現細胞なのですが、ちなみに後者の場合、CMVプロモーターで別のタンパクを発現するのプラスミドを後からトランスフェクションしても、もうそれは発現しないのかなぁと。
 
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(無題) 削除/引用
No.369-3 - 2011/05/09 (月) 05:28:00 - おお
メチレーションが関与しているという話もありますね。それであれば外部からとランジェンとにプラスミドで発現させてもそちらは働く可能性があります。

(無題) 削除/引用
No.369-2 - 2011/05/08 (日) 19:53:39 - Actias
ウイルスプロモーターは、発現抑制されるらしい。
ESにレンチウイルスでGFPを入れたマーカーを作って、維持していると消えるとか。

iPSを作るのに「Nanog-GFPで光るやつを選ぶ」っていうのがあるらしいけど、「光ったけど維持したら光らなくなったやつ」が、「山中因子発現ベクターのサイレンシングがうまくいっていて、いいiPS」といううわさを学会で聞きました。

安定発現株の長期培養 削除/引用
No.369-1 - 2011/05/07 (土) 14:49:01 - あ
基本的な質問です。。。

薬剤耐性で安定発現株を作っても、培養を続けると発現しなくなることがよくあると思いますが、発現が下がった細胞は、実際にはどういうものが多いのでしょう。ゲノムに組み込んだ発現カセットが抜けるのでしょうか。薬剤耐性は残っているので、部分的に削れるのでしょうか。それとも、転写とかとか翻訳とか発現に必要な分子の方が欠落した細胞が生まれてくるのでしょうか。どなたか調べたことありませんか。
CMVプロモーターの発現細胞なのですが、ちなみに後者の場合、CMVプロモーターで別のタンパクを発現するのプラスミドを後からトランスフェクションしても、もうそれは発現しないのかなぁと。

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