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(無題) 削除/引用 No.363-9 - 2011/05/13 (金) 21:01:30 - 310 マーカーのエタ沈はおかげさまで成功しました。Dyeも見た目には残らず、量も見た目では減っていません。エタ沈メイトのWebには100bp以上のDNAが適用範囲でしたが、50bpのバンドも見た目はエタ沈前と変わりませんでした。不要といわれている-80C10分インキュベートしたせいかも知れませんが。よく分かりません。 nnn様、おお様、ありがとうございました。 以下余談になります。 nnn様に教えていただいた、Fermentusのマーカーが届いたので、SYNERGEL3%とアガロース1％をエタノール上で混ぜてから0.5xTBEに加えてゲルを作り泳動したところ、50bpと35bpがきれいに分かれました。アクリルアミドからの50bpの回収率が低い場合には、このゲルでも回収ができそうなので安心しました。ただし粘性と融点が非常に高く80度で固まりかけたり、いくら注いでもねっとりとした液が切れなかったりします。説明書で指摘されているようにTBE以外を使えば楽だったかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.363-8 - 2011/05/06 (金) 09:54:00 - ~ >100bp-30bp位 300bpですかね。 http://www.invitrogen.jp/catalogue/invitrogen/10821-015_001.shtml 10〜330bpの2本鎖DNAなので要求範囲をカバーしていて、 1μg/μl ; 10mM Tris-HCl (pH 8.0), 1mM EDTAと書かれていますのでダイも入っていないのでしょう。

(無題) 削除/引用 No.363-7 - 2011/05/05 (木) 13:35:49 - 310 おお様 教えていただきありがとうございます。MolecularCloningも見かけたら呼んでみようと思います。

(無題) 削除/引用 No.363-6 - 2011/05/04 (水) 03:10:10 - おお >[Re:5] 310さんは書きました : > nnn様 > > ありがとうございます。見落としてました。お恥ずかしい限りです。 > > おお様 > ありがとうございます。Mgを使ったエタチンはやったことは無いので、どのくらいの濃度をお使いになっているか、教えていただけるとありがたく存じます。 モレクロに書いてあったと思いますが今手元にはありません。。。ルーティンワークでもないので。。おそらく大抵のDNA溶液には1mMほどのEDTAが入っていますのでそれを考慮して上乗せで加えるといいかと思いますが。。。やまかんて5ー10mM程度と(ちょっと無責任ですが)おもってますが、あまり多いとエタノールに不溶なぶんがともに落ちてくるという解説も見たことがあるようなきがします。RT用のバッファーは-10mMのMgがはいっていますね。直接エタチンされる方がいるかどうか分かりませんが。 すいませんお役にたてませんで。。。

(無題) 削除/引用 No.363-5 - 2011/05/04 (水) 02:18:17 - 310 nnn様 ありがとうございます。見落としてました。お恥ずかしい限りです。 おお様 ありがとうございます。Mgを使ったエタチンはやったことは無いので、どのくらいの濃度をお使いになっているか、教えていただけるとありがたく存じます。手元にある50bpラダーと、ここで教えていただいて作ったアクリルアミドキャリアがありますので、その一部を使いまず試してみます。低分子回収用としては、別用途で使うためにオーダーしたMermaidというオリゴヌクレオチド回収用のキットがありますので、試薬に余裕がありそうならば試してみようと思っています。

(無題) 削除/引用 No.363-4 - 2011/05/04 (水) 01:59:54 - おお エタチン、アルコールでWASHでかなりおちると思えますが、、、ただ小さいフラグメントをつかっているので、Mg、キャリアーを加えてどこまで回収できるのかという点ではわかりません。

(無題) 削除/引用 No.363-3 - 2011/05/03 (火) 17:59:34 - nnn あ、FermentasでDye無しの同等品、ありますね・・・。 http://www.fermentas.com/en/products/all/dna-electrophoresis/generuler-dna-ladders/sm121-generuler-ultra-low

Dyeの入っていない低分子DNAマーカー＆Dye除去 削除/引用 No.363-1 - 2011/05/03 (火) 14:54:07 - 310 いつもお世話になっております。 Dyeの入っていない低分子DNAマーカーを探しています。具体的には100bp-30bp位でバンドのサイズを確認したいと思っています。 FermentasのO'GeneRuler™ Ultra Low Range DNA Ladder, ready-to-use, 10-300 bpはサイズ的には良いのですがDyeが入っています。 Dyeを後で抜きたいときはフェノールクロロフォルム＆エタチンが一般的なのでしょうか？やったことないので、分かる方にご教示いただければ幸いです。 よろしくお願いします。

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