どなたかご存知でしたらお知恵を拝借したいのですが、よろしくお願いします。
消化管の器官培養についてです。
Leibovitz's L15-10%FBSを培養液として使用しています。
管腔を開いた消化管を3-5mmくらいの長さに切り(横断)、数日間培養します。以下の条件を検討したのですが、いずれも培養を開始した次の日には上皮がボロボロ(結合組織から剥がれる)になってしまい、形態をうまく保持できません。
・コーニングのTranswell(ポアサイズ8um)に培養液を満たし、メンブレン上に消化管断片をおいて培養。ただし、消化管全体が浸らないように培養液の液量を調整。
・消化管断片を培養液に完全に浸して培養。
・FBSの有無を検討。
・HydrocortisoneとInsulinの添加を検討。
・ぼろぼろのまま3日間培養を続けてもコンタミはしない。
といった状況です。
上皮がぼろぼろと言っても、細胞自体は壊れていないので、浸透圧の問題ではないと思います。
どなたか良いアイデアがありましたら、ご助言いただけないでしょうか。
よろしくお願いいたします。 |
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