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(無題) 削除/引用 No.337-13 - 2011/05/07 (土) 07:33:50 - おお >[Re:12] ABZOさんは書きました : > もし条件モードが定電流なら　ゲルの数　x　１枚あたりの電流値（２０mA)だよ。だから３枚なら60mAだね。　 並列の時に限りってそうですね。ゲルタンクに何枚か直列にゲルをいれるやつは何枚あっても20mAで流せばいいはずですね。 並列で違うゲルタンクを使う時はゲルタンクの水位とか抵抗値の違いで分配される電流がそれぞれ変わってくるかもしれませんね。 ゲルタンクに複数直列でトランスファーができるタイプを考えると定電圧ならそれぞれのゲルカセットの抵抗値で電圧のかかり方が変わるので(理想的には変わらないはずですが)定電流のほうが再現性がいいかもしれませんね。

(無題) 削除/引用 No.337-12 - 2011/05/06 (金) 23:59:36 - ABZO もし条件モードが定電流なら　ゲルの数　x　１枚あたりの電流値（２０mA)だよ。だから３枚なら60mAだね。　もし定電圧なら　ゲルの数の関係なく同じ値だね。昔中学校のとき理科の電流のところで習った事ちょっと思い出せば、なぜそうなのかは理解してもらえると思う。 うちのラボは定電流派が多いけど、定電圧でやってる人もいるよ。 メタノールは数十秒～1分くらいやれば十分だよ（もちろん震盪しながらね）。べつに10分とか長くやってもいいけど、特にそれで何かよくなる訳ではないので、あえて長時間しなくてもいいとおもう。水の洗浄はせずに直接トランスファーバッハに入れて平衡化してる。メタノールの持ち込みが気になる人は洗うのかもしれない。まあどっちでもいいね。トランスファーバッハでの平衡化はしっかりやった方がいいらしい。これは結構大事みたくなんかの本に書いてあった。それで一応10分程度はやってる。長い分には特に悪い事はないとおもうけど10分で特に問題はおきていない。まわりには5分くらいの人もいるけど、特に問題はおきていないみたいだけどね。 平衡化のところ以外は、まあとりあえずやってあればいいみたいなかんじで、正直あまり本質的な部分ではないとおもう。 いいかんじの結果が出だしたら、その条件は固定した方がいいかもね。

電気泳動は 削除/引用 No.337-11 - 2011/04/28 (木) 18:17:08 - 100P ゲル2枚のときは1枚のときの倍の電流にしないと泳動に時間がかかります。私が使っているBIO-RADのパワーサプライはそうです。

(無題) 削除/引用 No.337-10 - 2011/04/27 (水) 10:26:10 - おお そういえばバイオラッドで4っついっぺんにトランスファーできるやつがなかったっけか。

(無題) 削除/引用 No.337-9 - 2011/04/27 (水) 08:43:28 - Boston-Pullman 私も低電圧派です。発熱により電流が下がってくるので、氷漬けにするかコールドルームで転写しています。 ２枚のゲルのトランスファーですが、invitrogenのシステムでは１つのカセットで２枚転写できるとマニュアルに書いてあります。あえて、２台使う必要はないかと思います。

(無題) 削除/引用 No.337-7 - 2011/04/26 (火) 10:33:01 - TS これを機会に低電圧で流す、転写するようにする、というのは？ Bio-radの本とかで（細かい話は忘れましたが）SDS-PAGEもタンク式転写も定電圧を推奨していますよ。 あ、もちろん論議、思考することは大切なことなので、色々考えることを抑止しようとするコメントではありません。 今後のアドバイスとして。。。

(無題) 削除/引用 No.337-6 - 2011/04/26 (火) 01:24:27 - おお ゲル1枚と2枚のタンクで抵抗値が変わると思いませんか。そうすると1枚のタンクの方により多くの電流が流れます。そうしたら同じ条件で流すことはできないでしょう。えいどうそうのバッファー自身抵抗値があるでしょうしそうするとどの程度さが出るか検討がつかないのではと思いますが。。。アウトップット複数あるパワーサプライを使っているなら、その仕様を確認してみてください各アウトプットがどう制御されているかを。多分同じアウトプットを分枝させているようにおもいますが。もう一つパワーサプライが必要でラボになかったらちょっと周りのラボ除いてえいどうの時だけでも借りれないものかお伺いしたらどうですか。

(無題) 削除/引用 No.337-5 - 2011/04/25 (月) 23:44:52 - AAA おおさん 回答ありがとうございます。 wet式でTransferしています 電流に関しては疎いので・・・・。 コンデンサーは並列になっていると記憶しているのですが 泳動層2台の場合は、80ｍAで流せばいいってことですかね？ そうすると、ゲル板2組と1組が入っている泳動層で泳動時間が変わるような気がするのですがどうなんですかね。 一応、前のラボと試薬の組成が違ったりするので 今のラボの流儀に従うつもりです。 余裕ができたら、以前のやり方とも比較してみたいと思っています。

(無題) 削除/引用 No.337-4 - 2011/04/25 (月) 23:35:46 - AAA Actiasさん 別に上から言われたわけでわないんですが 二つの処理の仕方だと、どちらがいいのかわからなかったので 質問させてもらいました。

(無題) 削除/引用 No.337-3 - 2011/04/25 (月) 23:06:21 - おお >[Re:1] AAAさんは書きました : > 複数質問があるのでよろしければ教えてください > > SDS-PAGEの時にゲル1枚につき20mAで流すのはわかるんですが > 仮に、ゲル板が3枚あって泳動槽を2台使うときも > 単純に×3の電流で流していいのでしょうか？ セミドライですかウエットですか。。。 いずれにしてもだめでしょう。理科の並列つなぎと直列つなぎを思い出してください。ただ均等に抵抗値があるというのもちょっと危ういかもしれません。 > > あとTransferのPVDF処理なんですが > 以前いた研究室ではメタノール：3sec　milliQ:10sec　buffer:5min > で処理していました。 > > 今の研究室ではメタノール10min以上　buffer:各自の好み > なんですが、処理の時間のギャップに戸惑っています。 おそらくどっちでも変わらないから両方のやり方があるんでしょうね。そういう意味では今のラボの流儀を尊重したらどうでしょうか。あと科学者なら両方試してどちらがベターか単純に試したくなるような気がしますが、、、 メタノールはO/Nだといってやたら周りの人は間違えていると主張する人もいました。いや間違えているはないだろうに、、、

(無題) 削除/引用 No.337-2 - 2011/04/25 (月) 22:04:43 - Actias 研究室の古株からそういわれたのなら、そうしなさい。

western blotについて質問です 削除/引用 No.337-1 - 2011/04/25 (月) 12:59:08 - AAA 複数質問があるのでよろしければ教えてください SDS-PAGEの時にゲル1枚につき20mAで流すのはわかるんですが 仮に、ゲル板が3枚あって泳動槽を2台使うときも 単純に×3の電流で流していいのでしょうか？ あとTransferのPVDF処理なんですが 以前いた研究室ではメタノール：3sec　milliQ:10sec　buffer:5min で処理していました。 今の研究室ではメタノール10min以上　buffer:各自の好み なんですが、処理の時間のギャップに戸惑っています。 今後どちらの処理をやっていこうか迷っているんですが 皆様的にはどのように処理をしているのでしょうか？ よろしければ教えてください。 基本的な事ばかりですみませんが 最初が重要だと思ったので質問させていただきました。

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