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お礼が遅くなってしまってすみません。 削除/引用 No.329-7 - 2011/05/06 (金) 10:55:03 - 木村 Boston-Pullmanさん→ありがとうございます！別のプレートを使ってやってみたのですが、やはり結果はばらばらになってしまいました。しかし、もう少し粘り強くやってみます。 HIHさん→そうなんですか！！参考になりました。ありがとうございます。 ~さん→毎回本当に色々ありがとうございます。4well分というのは、コントロール3点とサンプル1点です！！コントロール3点の結果のばらつきがひどかったので、もう一回コントロールをやるついでに、再現性をしらべるため、サンプル一点も加えてやりました。本当なら30well分やらなくてはならないのですが、その時はすぐに確かめないといけなかったので、4well分やりました。そしたら、コントロール3点のばらつきはなくなったのですが、サンプル一点の値が以前と違い、大混乱してしまいました。 SHさん→検量線はひかなくてはいけないですよね！！しかし、ひかなくていいと教授に言われたため、ひけませんでした…。コントロールと比べて、サンプルがどうなるかだからひかなくてよいのだとか…。その意味がよくわかってないので勉強しなおします。 ありがとうございました。 モモさん→私の書き方が悪くてすみません。~さんのお礼のところにも書きましたが、4well分というのは、コントロール3点とサンプル1点です！！コントロール3点の結果のばらつきがひどかったので、もう一回コントロールをやるついでに、再現性をしらべるため、サンプル一点も加えてやりました。とりあえず、サンプルがコントロールとどう違うかを見ています。でも、ありがとうございました！ 皆様本当にありがとうございます。キットじゃなくて、プレートを作るところからやることにしました。また困ることがありましたら申し訳ないのですが、知恵をお貸し頂ければと思います。

(無題) 削除/引用 No.329-6 - 2011/04/30 (土) 12:44:39 - モモ ２回目、３回目でコントロールを取らなかったということなんでしょうかねぇ。Kitなら８wellずつ使うことになるので、４検体を測るときは残りの４wellでコントロールを取れるんですがねぇ・・・

(無題) 削除/引用 No.329-5 - 2011/04/25 (月) 20:58:13 - SH 2,3回目は4ウェル分測定ということはもしかして検量線なしの測定ですか？ 検量線はプレート毎におかないと値はバラつくと思うんですが・・・

(無題) 削除/引用 No.329-4 - 2011/04/25 (月) 09:23:27 - ~ >ELISAキットのwell数の差によって おそらくは4連、8連ピペットなどで一気に試薬を入れていきますよね。 ウェルに試薬を入れる順番を決めておいて、一番最初と最後をコントロールにすると、試薬を入れる時間によるズレの範囲が分かります。 また、1つのサンプルについて希釈系列を作ったり、1回で複数ウェルでアッセイしたことはありますか？ そこで直線性や再現性が見られないのであれば、ELIZAプレートの出来が悪い可能性があります。 >同じサンプルでやっても >細胞は吸わないように気をつけていますし 同じサンプルというのは、ある時に回収を行なった1ロットのサンプルという意味ではないのですか？そうであれば、細胞を吸う・吸わないは関係のないパラメーターでしょう。 同じ処理をした異なるサンプルの話であれば、ELISA部分なのか培養部分なのかの問題の切り分けをしないと問題解決が進みません。 前回に測定を行なったサンプルを一緒にアッセイすることで、前のサンプルの再現性があるかどうかが分かります。前のサンプルが同じ値を示し、今回のサンプルが異なる値を示すのであれば、ELISA部分には問題はないでしょう。 >二回目、三回目は4well分 意味がよく分からないのですが、コントロール3点とサンプル1点（または他の組合せで計4ウェル）でしょうか？ それとも、コントロール無しで4サンプルという意味でしょうか？ 毎回コントロールを置いていないのであれば、反応時間によって吸高度は変わります。

(無題) 削除/引用 No.329-3 - 2011/04/24 (日) 17:39:21 - HIH 私は色々とELISAをやっていますが、今までに1つだけどうしようもないKitを掴んだことがあります。 そのKitも測定するたびに値が変動する(同一サンプルでも)のでどうしようもありませんでした。(結局違うKitにしました） 手技や工夫ではどうしようもないKitが存在するのは事実だと思いますが、まずは他の可能性を当たるべきですね。

(無題) 削除/引用 No.329-2 - 2011/04/24 (日) 01:48:00 - Boston-Pullman 細胞数や状態によっても変わります。上清を小分注して、別のプレートを使っても同じ結果がでるのか確認する必要があります。これで問題なければ、ELISA に関する技術的問題はないとなります。

ELISAキット 削除/引用 No.329-1 - 2011/04/23 (土) 16:55:04 - 木村 前回は大変お世話になりました。 また行き詰ってしまったのでよろしくお願い致します。 今回ELISAキットを使ってサンプル(細胞の上清)を測定したのですが、同じサンプルでやっても毎回違う値になってしまいます。 キットでそんなに毎回違う値を出す奴なんて今までに見たことないと怒られてしまいました。 しかし、原因が分からず苦戦しています。プロトコールはちゃんと見ていますし、自分で調べて注意しなければいけないところは気をつけているつもりです。 ただ、私が考えられる原因としては、ELISAキットのwell数の差によって、操作の時間が違ってくるのかなと思いました、一回目の測定はは30well分、二回目、三回目は4well分という風にやりました。4well分をやった理由は、30well分やった値が信頼があるかどうかすぐに確認する必要があったのでやりました(結果的に違ってしまったのですが・・・）。 あとは、二回目の4well分は、2005年の古いキットのプレートを使ってしまったことです。開封してあったものですし、さすがに古すぎるものを使ってしまったのかなと思っています。 試薬やサンプルは常温に戻していますし(抗体は直前まで冷蔵庫）、プロトコールどうり時間も守っていますので、これぐらいしかちょっと思いつかないです。すみません。 教授には、細胞の上清を取る段階でおかしいのではないかといわれてしまいましたが、細胞は吸わないように気をつけていますし、何をこれ以上気をつけていいのか分かりません。 もしELISAキットのご経験がある方いましたら、どうかよろしくお願い致します。

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