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(無題) 削除/引用 No.302-5 - 2011/04/17 (日) 00:56:07 - Boston-Pullman 細胞に極性を与えて、非対称分裂も説明できます。 FACS 後、陰性細胞をコントロールとして培養されていますか？陽性細胞が出てくるのか？分裂するのか等。

(無題) 削除/引用 No.302-4 - 2011/04/16 (土) 22:05:14 - た 質問者です。レスありがとうございます。 ＞細胞周期によって ちなみにしばらくそのクローン？を飼っても、陽性細胞は一定の率で維持されますので、やはり均一のクローンが取れており、yahooさんのように、細胞のステートによって見かけの陽性、陰性が出ているのではないかと考えています。しかしＣＨＯ細胞ですしね。 ものすごくターンオーバーが早いタンパクということでしょうか。 もし、例があれば、具体的に教えていただけると（後学のため）助かります。

(無題) 削除/引用 No.302-3 - 2011/04/16 (土) 21:05:49 - qq ＞そういうのありますよ。 ＞特に細胞周期に従って局在の挙動を変えたりするものなど。 だとすると、（一見）陰性だった細胞を培養しても、50%程度に陽性が出てくるのかなぁ？

(無題) 削除/引用 No.302-2 - 2011/04/16 (土) 18:03:28 - yahoo そういうのありますよ。 特に細胞周期に従って局在の挙動を変えたりするものなど。

細胞のサブクローニングがうまくいかない 削除/引用 No.302-1 - 2011/04/16 (土) 15:17:13 - た いつも有用なご助言をいただき、お世話になっております。 現在、後輩の仕事で、ある膜タンパクを発現したCHO細胞（トランスフェクタント）を取ろうとしています。 具体的には、 １.CHO細胞にこのｃDNAをトランスフェクト ２.ZEOCIN耐性遺伝子をもとに、コロニーをスクリーニング ３．バルクの陽性クローンを限界希釈法、（５個/ウェル）から始めて、さらに１２段階に１/２ずつ段階希釈 ４．計算上、１個/ウェル以下のウェルから、クローンを単離し、３０個程度を、当該遺伝子の、細胞外を認識する抗体（モノクローナル）でFACS解析 という手順を踏んでいます。 しかしながら、スクリーニングの結果、当該分子がFACSで５０％程度陽性になる細胞集団しか取れて来ません。陽性集団と陰性集団ははっきりとpopulationとして区別できます。 さらにこの５０％陽性集団を、２回目のサブクローニングに供しても、次のクローンがまた５０％陽性しか取れて来ません。 つまり、どのウェルにもはじめから、きっちり陽性と陰性の細胞が１個ずつ入っていたような結果になるのですが、他に何か、考えられる原因や、改善点はありますでしょうか。

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