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(無題) 削除/引用 No.294-4 - 2011/04/15 (金) 04:09:08 - Boston-Pullman 私の場合は、発現量が高い分子だったので（骨髄細胞）、自家蛍光は特に問題になりませんでした。 固定で広がった感じになっても、メインの集団において蛍光を解析すればよいのだと思います。界面活性剤を使ったら、細胞集団のFSC/SSCがシフトするので、それに比べれば問題にならないです。 技術的に気になったのは過度な洗浄により、細胞が崩れることです。ピペット操作は慎重にする必要があります。

(無題) 削除/引用 No.294-3 - 2011/04/15 (金) 03:32:18 - yyy PFA固定後には自家蛍光が強くなる傾向があって、特にフルオレセインやGFPのフィルターセットで顕著ですが、そう言う可能性はあるでしょうか？　個人的には顕微鏡の経験しかないので、FACSでその影響がどの程度出るかはわかりませんが。

(無題) 削除/引用 No.294-2 - 2011/04/15 (金) 03:15:40 - Boston-Pullman >[Re:1] NBさんは書きました : > 固定していない時よりも，ドットが少しばらつきます． ということは細胞外タンパク質を染色しているのでしょうか？そうであれば、氷上、１０分もやれば十分です。 予約がとれず、固定して３日後に解析したことがあります。集団が広がった印象はあります。Density blot で細胞集団の中心を確認してから、広がった分の細胞を排除して、解析を行いました。レビュアーからは一切クレームはありませんでした。

パラホルムアルデヒド 削除/引用 No.294-1 - 2011/04/15 (金) 01:07:01 - NB 初歩的な事ですが，どなたか教えて頂ければ幸いです． 白血球を蛍光染色して，FACSで解析をしているのですが，2%パラホルムアルデヒドにて固定する際の，正しい方法が分かりません． 蛍光染色が全て終わった後，どれくらいの時間，2%パラホルムアルデヒドで固定するのでしょうか．また，固定後は，FACS bufferで数回？洗浄するという形でよいでしょうか． 30分程固定し，FACS bufferで2回洗浄後にFACS解析してみたのですが，SSC, FSCで展開した際，固定していない時よりも，ドットが少しばらつきます．これは仕方がないのでしょうか？（固定していない時には全く出ない様な位置に，少しですがドットが出てしまいます．） ちなみにパラホルムアルデヒドは新鮮なものを使用しており，Ph調節等，作製には問題ないと思います．

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