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(無題) 削除/引用 No.281-5 - 2011/04/12 (火) 14:12:50 - たろちゃん いろいろご指摘ありがとうございます。 タンパク質の抽出は組織や細胞から抽出しています。 組織の場合はsanta cruzのRIPA bufferに3種類のproteaseを加えてホモジナイザーでつぶした後、30分ほどon iceして遠心かけてその上清を使用しております。 細胞の場合(このあと酵素の測定も行う)はTris-bufferにて混濁して、超音波破砕をしてその上清を使用しております。

(無題) 削除/引用 No.281-4 - 2011/04/12 (火) 11:31:52 - 通りすがりん タンパクの抽出プロトコールを教えてください。 ＤＮＡや難溶性タンパクが影響しているかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.281-3 - 2011/04/11 (月) 17:55:28 - Boston-Pullman 原因だとは断言出来ないのですが、DNAが十分切断されていない気がします。

(無題) 削除/引用 No.281-2 - 2011/04/11 (月) 17:18:26 - おお マーカーが乱れないならサンプルの状態が影響しているかもしれません。思い切ってサンプルの量を1/3-1/5に希釈して減らしてみてはどうでしょうか。

ウェスタンブロッティングのバンドの乱れについて 削除/引用 No.281-1 - 2011/04/11 (月) 16:54:41 - たろちゃん 　いつも勉強させていただいております。 　ウェスタンブロッティングをしておりますが、バンドを検出できるのですがなぜかバンドがすべてのレーンでM字型に乱れるのです。同じような経験をされた方いらっしゃいましたら解決方法を教えていただけないでしょうか？ 　ちなみにゲルは12・5％でたんぱく量は10-30μgくらい流しております。スタッキングゲルは10-15mAでゲル内では15-20mAで流しております。サンプルアプライ前には2×sample bufferでboilしております。 　どうしてそうなるのか分からずこまっております。どなたかよろしくお願い申し上げます。

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