Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

トピック一覧　|　研究留学ネットに戻る

最新のフォーラム　|　このフォーラム　|　ひとつ前のフォーラム（readのみ）

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

shDNA導入細胞のオーバーエクスプレッション トピック削除
No.242-TOPIC - 2011/04/01 (金) 18:39:50 - しゅん
最近、細胞にshDNAを導入し、遺伝子抑制を行い安定株を作成しました。現在、その細胞を用いて解析を行っています。
今後、発現抑制を行った細胞株で、同じ遺伝子を再発現させたいと考えていますが、なかなか良いプロトコールが見つかりません。
どなたか良い方法を御存じの方がいれば教えていただきたいと思います。
宜しくお願いします。
　
- このトピックにメッセージを投稿する -



全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

(無題) 削除/引用
No.242-3 - 2011/04/01 (金) 19:21:32 - 中年
良いプロトコールも何も、元の細胞に発現プラスミドをトランスフェクションする方法と同じでしょう（最初に使った薬剤耐性マーカーが使えなくなるのは別として）。もちろん、shRNAの標的配列にはsilentな変異を導入するか、別の種のcDNAを用いるかする必要はありますが。

(無題) 削除/引用
No.242-2 - 2011/04/01 (金) 19:13:39 - TS
ベクターベースのsiRNAを使っていて、レスキュー実験をしたいということで良いのでしょうか。

そのshRNAのターゲットにならない遺伝子配列のタンパク質を発現させればよいと思います。

当該タンパク質発現ベクターを持っていると思いますが、
点変異でサイレントミューテーションを入れて、ノックダウンがかからないようにしておけば良いのではないでしょうか。

あるいは、他の種のものを導入するという手もあると思います（配列的に問題がなければ）。もちろん機能しそうなものであれば、ですが。

shDNA導入細胞のオーバーエクスプレッション 削除/引用
No.242-1 - 2011/04/01 (金) 18:39:50 - しゅん
最近、細胞にshDNAを導入し、遺伝子抑制を行い安定株を作成しました。現在、その細胞を用いて解析を行っています。
今後、発現抑制を行った細胞株で、同じ遺伝子を再発現させたいと考えていますが、なかなか良いプロトコールが見つかりません。
どなたか良い方法を御存じの方がいれば教えていただきたいと思います。
宜しくお願いします。
全3件 ( 1 〜 3 )　 前 | 次 　1/ 1. /1

パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール  　アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存（次回の入力の手間を省けます）
上に上げない（トピックの一覧で一番上に移動させません）
解決（問題が解決した際にチェックしてください）
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 
〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。