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(無題) 削除/引用 No.226-8 - 2011/04/01 (金) 01:38:36 - おお 照射直後(細胞し誘導前)を取るとスッキリすると思いますがいかがでしょうか。照射時間が長くなければですが。

(無題) 削除/引用 No.226-7 - 2011/03/31 (木) 17:35:53 - Gray みなさま、ありがとうございます。 確かに、Tunelの感度も重要になってくると思います。 直接切断されたものがどれだけTunelで染まるか分りませんが、直接切断を強く認識するほど感度が高くなければ、X線による直接切断は考慮しなくても良いのかもしれないと思いました。 参考論文ではX線照射後にTunel染色してアポトーシスの検出をしておりましたので、直接切断はさほど考慮しなくて良い…と思ったのですが、本当にそれで大丈夫か不安に思ったので投稿してみました。

(無題) 削除/引用 No.226-6 - 2011/03/31 (木) 14:47:17 - Boston-Pullman プラスミドにUVを当てて電気泳動した際、スメアが見られるようであれば、直接切断による影響は無視出来ないかと思います。 でも、直接切断が仮にTUNELで検出できるほどの程度であれば、その細胞は結局死ぬと思います。

(無題) 削除/引用 No.226-5 - 2011/03/31 (木) 09:14:30 - おお いま細胞しでDNAを切る酵素は複数ありますが、たとえばICAD分解とか、Casp3活性化とかとパラレルかどうか、インヒビターなどで抑えた時にTUNELでの染色性が落ちるとか(定量は難しいかもしれませんけど)いう視点で妥当性を検証するのもいいかもしれません。 固定とかしてからX線照射するとわかるかなぁ。。。

(無題) 削除/引用 No.226-4 - 2011/03/31 (木) 08:39:40 - 実験大好き 放射線によるDNA doube strand break (DSB)は必ずしも瞬時に修復されるわけではないと思います。H2AXや53BP1などの集積はかなり長く見られます。さらに晩発性DNA損傷も後で出てきます。しかしこれがTunnelで染まるのかはどうでしょう？　少なくともH2AXや53BP1などの集積は細胞当たりの個数として見ることができ、Tunnel法よりはるかに感度がいいと思われるので、DNA DSBの数によりますがTunnelでは染まらないかもしれませんね。。逆にアポトーシスの際はH2AXや53BP1などの集積は見られます。

(無題) 削除/引用 No.226-3 - 2011/03/30 (水) 20:43:04 - Gray X線照射で瞬間的に切断が修復されるとは驚きました。 修復にはもっと時間がかかると思ってました。 何か参考になる文献などがあればありがたいですが…。 まあ、まずは自分で調べてみます。 瞬間的様、ありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.226-2 - 2011/03/30 (水) 20:28:57 - 瞬間的 X線によるDNA切断は、生細胞内では瞬間的に(適切にも不適切にも）修復されるとされていると思います。 よって、そのことは問題ないかと思いますが、調べて再確認してください。

X線照射とTunel法 削除/引用 No.226-1 - 2011/03/30 (水) 17:43:46 - Gray X線を照射した後、apoptosisを起こしてる細胞をTunel法で染色してみようと思います。 ふと思ったのですが、X線にはDNAの直接切断と間接切断があるみたいですが、X線によって直接切断させるDNAもTunelで染まるのでしょうか？ 私はapoptosisが誘導される細胞を染めたいと思ってるのですが、X線で切断されたDNAも染まるのならば、apoptosis陽性細胞をちゃんと解析しているのか不安になりました。

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