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(無題) 削除/引用 No.225-8 - 2011/04/04 (月) 18:01:19 - S ~様 貴重なご指示ありがとうございます。Petri Dishでも血清を入れて培養すると張り付いてしまうのです。FCS由来のECMsが固相されてしまうからだと思いますが。 スターラーの使用！考えておりませんでした。確かにshakerよりも簡単に行えそうです！非常に良いsuggestionありがとうございました！ S

(無題) 削除/引用 No.225-7 - 2011/04/04 (月) 10:13:08 - ~ >~様は、CHOで10g/Lという回収量はすごいと思います。 書いてある数字は公開されているもので、うちのデータではありません。 大手製薬会社が細胞株（セレクションを含む）、ベクター系、培地、培養プロセスなどを全て最適化したときに出てくる数値です。 >ただ、普通のDishでは張り付いてしまうのですよね。 一応、ペトリディッシュで培養すれば張り付きはしないと思いますが、 液深が大きくなると静置のままでは酸素の供給などの問題でスケールアップ出来ません。 >ただ、CO2がを入れられるshakerが準備できません。 普通のスターラーが培養用に確保できれば、スピナーフラスコさえ買えば浮遊で培養できます。 手軽に１L単位の培養をするにはお勧めのやり方だと思います。 また、オートクレーブできる30cm四方のプラスチック製のトレイを用意して、 1枚あたり200mL入れられれば、25枚で5L培養できますので、 力技ならばそちらの方が早いです。

(無題) 削除/引用 No.225-6 - 2011/04/01 (金) 17:49:03 - S ~様 PerC6細胞、いろいろと調べましたがライセンス契約が大変そうですね。ライセンスされた企業は、大きくプレスリリースをしているくらいなので、細胞を得るのは時間がかかりそうです。 FreeStyle、気にはなっているのです。ただ、CO2がを入れられるshakerが準備できません。私が使用しているCHOも浮遊状態で飼育可能なものです。ただ、普通のDishでは張り付いてしまうのですよね。 ~様は、CHOで10g/Lという回収量はすごいと思います。 何かコツみたいなものはあるのでしょうか。 こちらではシグナルを変えたり、タグの影響、His or FLAG, IgGと試しているのですが、一向に改善されません。SUMOも試してみようかと考えている状況です。

(無題) 削除/引用 No.225-5 - 2011/03/31 (木) 17:58:02 - ~ ×メスアップ→○スケールアップ

(無題) 削除/引用 No.225-4 - 2011/03/31 (木) 17:56:43 - ~ PerC6は使ったことがありません。 ただ、シングルクローンを取っての発現量解析は発表されていますので、生産用でstableを作るのであれば問題なく取れるだけのトランスふぇくション効率は持っているでしょう。 >確かに浮遊細胞の方が細胞数を増やせるのでいいのかもしれません。 もし、現在使用している細胞が接着系のCHOなのであれば、InvitrogenのFreeStyle CHO-S細胞や293細胞のような浮遊系に変えるのもいいかもしれません。 トランスフェクションのステップから推奨の試薬がありますし、 浮遊系なのでメスアップも容易です。

(無題) 削除/引用 No.225-3 - 2011/03/31 (木) 10:17:49 - S ~様 ありがとうございます。現在は、約1mg/Literです。5mg程度必要なので、5L程度の培養を試みております。 PerC6細胞良いですね。リコンビナント抗体で良く使われるのですね。遺伝子導入効率はどうでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.225-2 - 2011/03/31 (木) 09:30:11 - ~ 現在の収量は培地1Lあたり何gなのでしょうか？ 今の時点で数g/Lは取れていて、それでも足りないというのであれば、PerC6細胞もいいと思います。 CHO細胞でのチャンピオンデータが10g/Lくらいで、PerC6だと27g/Lくらいと約3倍です。 ただ、ライセンスがちょっと面倒かもしれません。

培養細胞から蛋白回収でお勧めの細胞は 削除/引用 No.225-1 - 2011/03/30 (水) 16:55:02 - S しばしば、分泌性リコンビナント蛋白を得るのにCHOに遺伝子導入、stable transfectantを得て作製しております。いつもCHOよりも効果的な細胞があるのではないいかと考えているのですが・・・。 何か分泌蛋白を得るのにお勧めの細胞があればお教え下さい。R&D社は、マウスミエローマNS0を利用しているようですが、確かに浮遊細胞の方が細胞数を増やせるのでいいのかもしれません。

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