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脳 還流固定後の組織保存 トピック削除
No.190-TOPIC - 2011/03/22 (火) 09:21:40 - LALALA
5週齢ラットの脳組織を4%PFAで還流固定しまして、今後外固定を4%PFAで2晩行います。その後sucrose置換を行う予定ですが、その後すぐに免疫染色ができません(期間未定1ヶ月以上)。この場合sucrose(30%)に入れたままでいいのか、アルコールに移したらいいのか、どのように保存したらいいものでしょうか?お力をお貸しください。
 
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No.190-3 - 2011/03/22 (火) 18:37:39 - AA
組織さまのご指摘にあるように、凍結状態で保存するのが良いと思います。
修士のころ、私もスクロース液に漬けておいてしまったことがありましたが薄切後の染色性はいまいちでした。
(もちろんこれは必ずしもスクロース液の時間が原因かはわかりません)

ブロックで凍らせておけばすぐスライスできますし、薄切しておけばすぐ免染できます。

初日の灌流固定から後固定2晩、3日目のスクロース液に交換までしか作業ができない。

という意味でしたら、やはりご指摘あるように、後固定の時間の検討をしたほうが良いと思います。
5週令のラットの脳だと1晩でスクロースに置換されるかも際どいかもしれませんが・・・

(無題) 削除/引用
No.190-2 - 2011/03/22 (火) 11:41:43 - 組織
念のため確認ですが、凍結切片を作製されてるんですよね?
でしたら、組織がショ糖に沈んだら、コンパウンドに凍結包埋して、-80度で保存してください。

あと後固定が2晩ということですが、あらかじめこの条件で染色がうまく行くか確認しておいた方がいいかもしれません。抗原によっては固定を長くすると染まらなくなるものがあります。

脳 還流固定後の組織保存 削除/引用
No.190-1 - 2011/03/22 (火) 09:21:40 - LALALA
5週齢ラットの脳組織を4%PFAで還流固定しまして、今後外固定を4%PFAで2晩行います。その後sucrose置換を行う予定ですが、その後すぐに免疫染色ができません(期間未定1ヶ月以上)。この場合sucrose(30%)に入れたままでいいのか、アルコールに移したらいいのか、どのように保存したらいいものでしょうか?お力をお貸しください。

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