Bio Technical フォーラム

  • バイオ関連の実験をする上での、試薬、機器、プロトコールなどの情報交換の場です。
  • 新しいテーマで話を始める場合、質問をする場合は「新しいトピックを作る」から書き込みをしてください。
  • 質問に対して解答できる方は是非、書き込んで下さい。
  • このフォーラムにふさわしくないと管理人が判断した投稿は予告なく削除します。

トピック一覧 | 研究留学ネットに戻る

最新のフォーラム | このフォーラム | ひとつ前のフォーラム(readのみ)

このスレッドをはてなブックマークに追加このスレッドをはてなブックマークに追加

染色体のギムザ染色について トピック削除
No.183-TOPIC - 2011/03/19 (土) 16:27:58 - クロモ
細胞の染色体をギムザ染色して、染色体数をカウントしようと試みています。
その時の方法で分らないことが2点あるので、教えて下さい。

@カルノアで固定した後、乾燥させると染色体が伸長して観察しやすくなるみたいですが、乾燥はどのようにしたら良いのでしょうか?
固定した細胞懸濁液をスライドガラスに落とし、それを即座に65℃の乾燥器に入れておけば良いのでしょうか?

A @で作った標本をギムザ染色するとき、どれほどの濃度のギムザ溶液(何%?)で、何分染色すればよいのでしょうか?

教えて頂ければ助かります。
 
- このトピックにメッセージを投稿する -



5件 ( 1 〜 5 )  前 | 次  1/ 1. /1


(無題) 削除/引用
No.183-5 - 2011/03/22 (火) 19:45:01 - クロモ
ats様、AP様、助言ありがとうございました。
乾燥法とギムザ染色法が良くわかりました。
また、ギムザ原液の作り方も分りました。
皆様の助言を基に、染色をしてみようと思います。
ギムザは粉末ではなく、原液を購入すればよかったなと少し後悔してますが…。

(無題) 削除/引用
No.183-4 - 2011/03/22 (火) 17:09:57 - AP
学生時代に参照していた古い組織学の教科書によると、

ストック溶液は「60℃に加温したグリセロール5 mLに、ギムザ粉末0.15-0.25 gを加え十分に溶解したのち、5 mLのメタノールを加える」です。

染色に使うのはこれを希釈したもので、
水(蒸留水よりふつうの水道水のほうがいいとか)1 mLにストック溶液2滴ほど、
あるいは、
pH 6.4のリン酸バッファーで50倍希釈
となっています。

実習書より 削除/引用
No.183-3 - 2011/03/22 (火) 13:42:15 - ats
<乾燥法>血液細胞の例ですが、
(1)スライドガラスを70%エタノールから取り出し、濾紙に一端を触れて余分のエタノールを除去する。
(2)スライドガラスを水平に保持し、細胞懸濁液をパスツールピペットで約30 cmの高さから中央に滴下する。
(3)スライドガラスを種火の中を通過させて固定液に着火する。
(4)スライドガラス上の固定液 (酢酸10 ml+メタノール30 ml)が自然に燃え尽きるのを待つ。

<ギムザ液>粉末は使ったことがないです。あしからず。
(1)染色瓶に希釈用リン酸緩衝液 (150 mM,pH6.8)50 mlを入れ、ギムザ染色液(市販品)2 mlを加える。
(2)スライドを染色瓶に入れ10分間染色する。
(3)スライドの背面から流水で洗浄する。
(4)自然乾燥

(無題) 削除/引用
No.183-2 - 2011/03/19 (土) 17:58:21 - クロモ
補足ですみません。
ギムザ液は、ギムザの粉末を溶かす溶媒は、DWで良いのでしょうか?

染色体のギムザ染色について 削除/引用
No.183-1 - 2011/03/19 (土) 16:27:58 - クロモ
細胞の染色体をギムザ染色して、染色体数をカウントしようと試みています。
その時の方法で分らないことが2点あるので、教えて下さい。

@カルノアで固定した後、乾燥させると染色体が伸長して観察しやすくなるみたいですが、乾燥はどのようにしたら良いのでしょうか?
固定した細胞懸濁液をスライドガラスに落とし、それを即座に65℃の乾燥器に入れておけば良いのでしょうか?

A @で作った標本をギムザ染色するとき、どれほどの濃度のギムザ溶液(何%?)で、何分染色すればよいのでしょうか?

教えて頂ければ助かります。

5件 ( 1 〜 5 )  前 | 次  1/ 1. /1


パスワードを入力してチェックした記事を チェックした記事を

このトピックにメッセージを投稿する
名前 
メール   アドレス非公開
   タイトル 
本文      
設定  クッキーを保存(次回の入力の手間を省けます)
上に上げない(トピックの一覧で一番上に移動させません)
解決(問題が解決した際にチェックしてください)
暗証  半角英数字8-12文字の暗証番号を入れると、あとで削除、修正ができます。
送信 

〔使い方〕
  • 「アドレス非公開」をチェックすれば、自分のメールアドレスを公開しないで他の方からメールを受け取れます。
  • 問題が解決した際には、解決ボタンをチェックして解決した旨のコメントをつけてください。これは、初めにトピックを作った人と管理人のみが可能です。
  • 半角カタカナ、機種依存文字(全角ローマ数字、○の中の数字等)は文字化けの原因となりますので使わないでください。