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(無題) 削除/引用 No.148-7 - 2011/03/16 (水) 14:18:41 - protein 解決うんぬんというほど問題に感じなかったので深入りはしていません。 私の場合はスクレーパーで剥がして細胞を回収しました。 もし回収したことによる刺激が気になるのでしたら、 仰るように最初から２４wellにまくのがいいかと思います。 ちなみに、同じ細胞を96wellのU bottomにまいた際には接着していないようでした。 （ピペッティングで大部分の細胞を回収できた）。 ので、表面処理されていない、もしくはlow bindingのdishなどを使うのも ひとつの手ではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.148-6 - 2011/03/14 (月) 15:30:07 - DOLLIA >[Re:5] DCさん > DCは感受性の高い細胞ですので、ピペッティングなどの回収操作だけで刺激が入っていると思われます。 > そのために未刺激でも一度回収したDCはある程度刺激が入り、付着性になるのではないかと思います。 ありがとうございます。そうなると初めの時点から24 wellに播いた方が良さそうですね。 >[Re:4] proteinさん > Day6のMoDCが2h程度で12wellに付着してしまうのを経験しています。 > たしかに直前までフラスコ内で浮いていたことを考えると不思議です。 > 私はIL4とGMCSFを抜いたことが原因と思っていました。 私もそれらの添加物を抜いたことが原因なのかと思いましたが、DCさんが言われているように、機械的刺激も影響しているかもしれません。 因みにproteinさんはその問題をどのように解決されたのですか？？

(無題) 削除/引用 No.148-5 - 2011/03/14 (月) 10:41:37 - DC DCは感受性の高い細胞ですので、ピペッティングなどの回収操作だけで刺激が入っていると思われます。 そのために未刺激でも一度回収したDCはある程度刺激が入り、付着性になるのではないかと思います。 恐らく、回収した細胞を24 wellではなく10 cmディッシュに蒔き込んでもある程度は接着してしまうのではないでしょうか。 ちなみにこの回収時の刺激を避ける方法は存じません・・・

(無題) 削除/引用 No.148-4 - 2011/03/13 (日) 22:22:39 - protein Day6のMoDCが2h程度で12wellに付着してしまうのを経験しています。 たしかに直前までフラスコ内で浮いていたことを考えると不思議です。 私はIL4とGMCSFを抜いたことが原因と思っていました。 DCの性質が維持されなくなるというか。 詳しい人のレスを待ちたいです。

(無題) 削除/引用 No.148-3 - 2011/03/12 (土) 13:22:42 - DOLLIA >[Re:2] きよっちさん > maturationがかかったのではないかと。 > IFNとかTNFとか入れてないですよね？ > mDCになると付着して伸びますよ。 ありがとうございます。成熟後、付着するとは知りませんでした。 ただ50 ng/mL TNF-αの群は勿論ですが、非刺激群も同様に付着しています。 プレートも今までそれを使って浮遊細胞を培養していたので、どうしてこのケースだけ付着してしまうのかが不思議です。 とりあえずマーカーの発現を調べてみます。

(無題) 削除/引用 No.148-2 - 2011/03/12 (土) 13:03:06 - きよっち maturationがかかったのではないかと。 IFNとかTNFとか入れてないですよね？ mDCになると付着して伸びますよ。 入れてないのであれば表面処理ですかねぇ・・・・ 10cmのディッシュとプレートは同じ表面処理ですか？ 浮遊用のプレートに変えてみるとか

ヒト単球由来樹状細胞の培養 削除/引用 No.148-1 - 2011/03/11 (金) 15:12:47 - DOLLIA 最近ヒト樹状細胞の培養を始めたのですが、疑問が出てきたので質問させて頂きます。 プロトコールですが、ヒト末血からCD14マイクロビーズを使って得られた細胞を50ng/mL GM-CSFと20 ng/mL IL-4を含んだRPMI1640培地で10 cmディッシュにて一週間培養します。一週間後には浮遊して形態的にも樹状細胞となっていて、それらの細胞を24 wellに播き、刺激をしようと考えています。 質問は一週間10 cmディッシュにて培養すると殆どが浮遊しているのですが、24 wellに播き、次の日観察すると浮遊している細胞が3割か4割程度になってしまいます。樹状細胞は浮遊細胞ですが、これは何が原因なのでしょうか。宜しくお願いします。

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