Bio Technical フォーラム

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EMSAについて トピック削除
No.144-TOPIC - 2011/03/10 (木) 12:04:50 - 初心者S
EMSAを行いたいのですが、その際の試薬
10xbinding buffer
50% glycerol
100mM MgCl2
1μg/μl Poly(di.dc)
1% NP40
の組成などをご存知の方は教えていただけないでしょうか。
よろしくお願いします
　
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(無題) 削除/引用
No.144-3 - 2011/03/26 (土) 10:42:02 - Actias
質問の意味が分からん。

50% glycerol
100mM MgCl2
1μg/μl Poly(di.dc)
1% NP40
これらの組成を教える
というのは、何を期待していますか？


学生のころ、EMSAをはじめるにあたって、論文を比較したことがあります。
著者のラボグループごとに、いろいろな違いがあり、結局、よく分かりませんでした。

まずは、自分がやりたい研究の分野に近い論文のEMSA条件を探して真似たほうがいいと思います。

参考までに 削除/引用
No.144-2 - 2011/03/25 (金) 14:21:55 - にゃも

0.1-0.2μg/μl
20mM HEPES
10% Glycerol
50-100mM KCl
0.2μg/μl BSA
1mM DTT
1mM EDTA
0.1% NP40
2mM MgCl2

でやっています。

KClの濃度は生体内の条件に近ちかくしたいなら100mM付近ですが、
塩濃度を高めるとDNA-タンパク結合が弱まってしまいます。

あとＺｎフィンガータンパクの場合は0.1mM ZnSO4を入れた方が良いかもしれません。

EMSAについて 削除/引用
No.144-1 - 2011/03/10 (木) 12:04:50 - 初心者S
EMSAを行いたいのですが、その際の試薬
10xbinding buffer
50% glycerol
100mM MgCl2
1μg/μl Poly(di.dc)
1% NP40
の組成などをご存知の方は教えていただけないでしょうか。
よろしくお願いします
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