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QIsUhhwaGgzw 削除/引用 No.1379-15 - 2012/02/01 (水) 10:38:59 - dennis <url>http://dennisssblegh.com|dennis</url> gday Lovely site

OaJAivCiUGUIz 削除/引用 No.1379-14 - 2012/02/01 (水) 10:19:25 - dennis <url>http://dennisssblegh.com|dennis</url> hi Lovely site

(無題) 削除/引用 No.1379-13 - 2011/12/27 (火) 19:14:30 - Chorin ＞み-さん 添加量の濃度に関わらず部分的にコンタミしてしまいますので、 濃度はあまり関係がないのかなと思っていました。 しかしながら、大丈夫なように見えるウェルも長期培養したら コンタミ...なんてこともあるかもしれません。 培養できたら長めに見てみますね！ありがとうございます。

(無題) 削除/引用 No.1379-12 - 2011/12/27 (火) 19:08:39 - Chorin >> １．オートクレーブ可能なピペットマンであればオートクレーブしてみる ２．フィルターつきチップを試してみる フィルター付きチップはたくさん使う上高価なので購入が難しいかもしれませんが、 オートクレーブ滅菌が可能ですので、 ３．96ウェルプレートに、ピペットマンで培地を分注し、インキュベートする ４．培地をピペットマンでひたすらピペッティングし、その後にインキュベートする をやってみてから滅菌したいと思います。 今さっきやってきました！ >>チップを1プッシュで外せる金具？ どうやって、その金具の無菌性を担保できるのでしょうか？ また、金具と軸の隙間を拭くのは困難ではないでしょうか。 拭くのはかなり困難です。 研究室で以前から使用している別のピペットマンは、 コンタミ防止の名目でその金具が外されていたので、 本当に関係あるのかなと思って載せてみました。 >>「ある物質」 フィルター滅菌をした場合の、ロス量とコンタミ発生率で秤にかけてもいいのかもしれません。 滅菌した際にタンパク量等測定していませんでした。 もしまた精製して滅菌することがあればやってみます。

(無題) 削除/引用 No.1379-11 - 2011/12/27 (火) 18:26:29 - himawari あ、タンパク質なんですね。 ＞サンプルが脂溶性の高いもので培地とよく混ざっていないとそのように見えることもあるかも。 ＞ホウノキオール誘導体とかで経験あり。 撤回します。

(無題) 削除/引用 No.1379-10 - 2011/12/27 (火) 18:24:41 - himawari サンプルが脂溶性の高いもので培地とよく混ざっていないとそのように見えることもあるかも。 ホウノキオール誘導体とかで経験あり。

(無題) 削除/引用 No.1379-9 - 2011/12/27 (火) 17:41:57 - み その「ある物質」が無菌ではない可能性は？ 添加量が薄いものは一見コンタミしていないように見えるだけで、長期間培養すると同様に全wellコンタミするとか。 mediumに添加してからfiltrationしてみては？

(無題) 削除/引用 No.1379-8 - 2011/12/27 (火) 16:19:44 - ~ ピペットマンの外側を吹いても、中は拭けませんよね。 １．オートクレーブ可能なピペットマンであればオートクレーブしてみる ２．フィルターつきチップを試してみる 等をしてみてはいかがでしょうか。 出来ないようであれば、 ３．96ウェルプレートに、ピペットマンで培地を分注し、インキュベートする ４．培地をピペットマンでひたすらピペッティングし、その後にインキュベートする 等の操作でコンタミが起きるかどうかで簡便に判断できるかもしれません。 >チップを1プッシュで外せる金具？ どうやって、その金具の無菌性を担保できるのでしょうか？ また、金具と軸の隙間を拭くのは困難ではないでしょうか。 >「ある物質」 フィルター滅菌をした場合の、ロス量とコンタミ発生率で秤にかけてもいいのかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.1379-7 - 2011/12/27 (火) 15:41:25 - Chorin ＞まっくろんさん ある物質自体のストックが少なかったので 考えてませんでしたが、やってみます！

(無題) 削除/引用 No.1379-6 - 2011/12/27 (火) 15:18:42 - まっくろん 　フレッシュな培地に「ある物質」をいれて、インキュベーションしてみたらどうでしょうか？

(無題) 削除/引用 No.1379-5 - 2011/12/27 (火) 15:12:59 - Chorin ＞xyzさん 以前他細胞や体外受精培地でも使用していたのですが、 ほとんどコンタミはありませんでした。 ただ、ある物質は精製したタンパク質なので、 可能性はありますが...

(無題) 削除/引用 No.1379-4 - 2011/12/27 (火) 15:04:26 - xyz その「ある物質」のストック溶液にコンタミしている可能性は？

(無題) 削除/引用 No.1379-3 - 2011/12/27 (火) 14:53:21 - Chorin ＞ ご回答ありがとうございます。 希釈には基礎培地を使っております。 器具はピペットマンです。 希釈時は段階希釈でチップは交換しませんが、 播種時は濃度毎にチップを換え、ピペットマンの 柄の部分？をアルコールで拭いています。 確かにピペットマンの内部は怪しいかもしれません。 ちなみに、チップを1プッシュで外せる金具？ も原因になり得ますでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.1379-2 - 2011/12/27 (火) 14:43:24 - ~ >希釈時か蒔く際に操作ミスでコンタミしてるのが原因かと思うのですが 何を使って希釈・播種をしているのでしょうか？ そこで使用している器具が汚染されていたりしませんか？ 例えば、ピペットマンの内部は複雑ですので、内部を無菌で維持するのは困難です。

細胞を96ウェルで培養している時のコンタミについて 削除/引用 No.1379-1 - 2011/12/27 (火) 14:16:45 - Chorin こんにちは。修論の実験で細胞培養を行っているものです。 細胞培養時にある物質を加えてその効果を見る実験をしているのですが、 濃度を振って96穴プレートで培養すると結構な確率でコンタミしてしまいます。 そのコンタミの仕方も、「ある濃度のウェルは全部」「他の濃度のウェルは1ウェルだけ」 みたいな感じです。 希釈時か蒔く際に操作ミスでコンタミしてるのが原因かと思うのですが.... コンタミしているものの臭いは嗅いでいないのですが、 ピンクっぽかった培地が白っぽいオレンジ色になり、 細かーいものがゴヤゴヤと密集している感じです。酵母？ 蒔くものが多くプレートのフタを開ける回数が多い実験、96穴プレートを 扱う際の注意点等ありましたらご教授願います。 【補足】 使用細胞：BeWo 培地：Git+RPMI-1640、FCS、抗生物質 実験時に継代作業も行っており、そちらはコンタミしていないので、 培地が原因ではないと判断。 同じインキュベータを使用している人はコンタミしていないので、 インキュベータもクリア？

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