BioTechnicalフォーラム [シロイヌナズナ遺伝子へのT-DNA挿入による発現抑制について]

シロイヌナズナ遺伝子へのT-DNA挿入による発現抑制について

No.137-TOPIC - 2011/03/09 (水) 18:16:42 - トランスファー

現在、シロイヌナズナの遺伝子にT-DNA(トランスファーDNA)を挿入させる事によりその遺伝子の発現を抑制し、その抑制により植物体にどのような変化が見られるのか？という研究を行っています。

そこで目をつけた一つの遺伝子にかんしての質問です。

その遺伝子にはT-DNAがストップコドンの後ろに挿入されています。

その場合、T-DNAが挿入された遺伝子はきちんと抑制されるのでしょうか？

それとも開始コドンとストップコドンは元のままだから、大丈夫で何の変化も見られないはずなのでしょうか？

今、本当に困っています。皆様のご回答をお待ちしてます。

どうかよろしくお願いします。
　

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No.137-8 - 2011/03/10 (木) 12:43:27 - ンンノ

なんか、よくわかりませんが、片方の遺伝子ともう片方の遺伝子というのは
それぞれ別の遺伝子座にあるんでしょうか？
それとも対立遺伝子ですか？
そのレベルからはっきりしない文章です。
１００％同じ配列でパラログっていうんでしょうか？

遺伝子座が違うんなら、たまたまタギングラインがあったけど、実はマルチ
コピーの遺伝子で解析に困ってます。っていう状況ですか．．．．

植物ではT-DNAタギングされた遺伝子座の周辺は、継代を重ねるうちにサイレ
ンシングされるんではなかったでしょうか？

RT-PCRが難しいと考える理由がわかりませんが．．．
対象遺伝子の本来の転写開始点から転写が始まって、T-DNA領域まで転写が進
んだ途端に転写終結するんでなければキメラな転写産物ができるから、それ
を検出するようなプライマーセットを組めばいいんではないでしょうか。

(無題)

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No.137-7 - 2011/03/09 (水) 22:24:38 - トランスファー

その二つの遺伝子をT-DNAで挿入により発現を抑制させて、どんな変化が見られるか？を観てみたいです。

だから片方の遺伝子を抑制したときに、もう片方の遺伝子の発現が観られるかを観たいのです。

またT-DNAはUTRの領域にありました。

すみませんが、よろしくお願いします。

(無題)

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No.137-6 - 2011/03/09 (水) 22:13:53 - で、

何がしたいの？

100%配列が同じ遺伝子が同じ組織で発現していれば、ドミネガになってなければphenotypeはでないでしょ。

それからストップの後ろに挿入されていると書いてあるけどUTRに入ってるの？
それとももっと後ろに入ってるの？

シロイヌナズナ遺伝子へのT-DNA挿入による発現抑制について

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No.137-5 - 2011/03/09 (水) 20:03:01 - トランスファー

＞そんな似てんの？

＞どっちみち証明できなければ…。

100%配列が同じコピーがありました。

だから、変異体のホモかどうかの確認はその二つの全長＋αを挟む様にしてプライマーを設計して、PCRして確認しようと考えています。

ですがRT-PCRとかになると、今回の条件では難しそうですよね……