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(無題) 削除/引用 No.1360-7 - 2011/12/28 (水) 16:53:00 - み >[Re:6] 印象派さんは書きました : > 私の印象では、ぜひNaClをいれるべきです。たまに、NaClがないとアニールしないことがあります。 僕もNaCl入れておいた方が良いと思います。経験的に。 いわゆるTNEってやつですかね。 低燃費じゃないですよ。

(無題) 削除/引用 No.1360-6 - 2011/12/22 (木) 20:19:18 - 印象派 私の印象では、ぜひNaClをいれるべきです。たまに、NaClがないとアニールしないことがあります。

(無題) 削除/引用 No.1360-5 - 2011/12/22 (木) 19:59:57 - Harmonia ウレアをいれないTBSアクリルアミドゲルで、1本鎖と2本鎖は（しかるべきアクリルアミドの濃度のゲルで〕見分けつきます。 ウレアを入れないこと。

APさんありがとうございます。 削除/引用 No.1360-4 - 2011/12/21 (水) 15:51:04 - テリー 大差はないとのことなので、 とりあえず、このままEMSAをやってみたいとおもいます。

(無題) 削除/引用 No.1360-3 - 2011/12/21 (水) 14:51:52 - AP プラクティカルには、どちらでも大きな差はないでしょう。理論上は塩濃度が高い方がハイブリしやすいですが、ダウンストリームの実験で塩じゃまになる場合もあるでしょうし。 末端を標識したのですよね。ならどんなに微量でも検出できるんじゃないですか。メンブレンにブロットして、EMSAで計画している検出法を適用すればいいだけの話ではないですか。EtBrしか思いうかばなかったのなら頭かたすぎです。 ゲル電気泳動で二重鎖と一本鎖が区別できるかどうかはまた別の問題。一本鎖が二次構造を取らないのなら、移動度は二重鎖と区別つかない可能性大。

オリゴDNAのアニーリング条件について 削除/引用 No.1360-1 - 2011/12/21 (水) 12:39:51 - テリー 現在EMSAでもちいるオリゴDNAを1本鎖の相補的オリゴssDNA2本をアニーリングさせて作ろうと考えています。 1本鎖のDNAはもう手元にあってあとはアニーリングさせるだけなのですが、アニーリングの条件を教えていただきたいです。 1本鎖DNAはいまTE bufferに溶解してあり、そのまま１：１で混ぜて95℃で30秒加熱して、徐々に冷やす方法が調べた中であったので、その方法でやりました。 たださらに調べていくと、TE bufferに50 mM NaClをいれたものでアニーリングするのがでてきたのですが、どちらのほうがよいのでしょうか？ DNAがちゃんとできているかの確認で電気泳動等があるとおもうのですが、DNAの濃度がpmol/μlとかなので検出できそうにないのですが・・・ こちらのほうも確認する方法を教えてください。よろしくお願いします。

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