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EDTA 免疫染色 トピック削除
No.1359-TOPIC - 2011/12/21 (水) 09:48:17 - 梅干し
前回EDTAにて質問させて頂いた梅干しです.
さっそく御教示頂いたプロトコールで染色をおこなったのですが,EDTA溶液に浸したビーカーにMWで賦活化をしたところ,スライドから標本が剥がれてしまいます.
MASコートスライドグラスを使用しており,クエン酸を使用した賦活化ではそのような事は起こりません.
同じような経験がある方で改善策等ありましたら.教えて頂ければ幸いです.
宜しくお願い致します.
 
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No.1359-4 - 2011/12/23 (金) 17:45:08 - ABZO
クエン酸もキレート作用あるから、クエン酸で剥がれないなら、別に無理にEDTAでなくてもいいとおもうんだが。要はキレート剤でカルシウム取っぱらって、ホルマリンによる蛋白質間の架橋を不安定化することで加熱したとき切断しやすくするだけだし。クエン酸はカルシウムちゃんとキレートするよ。採血でいれると血全然固まらないし。
ふ活化のpHがアルカリのほうでやりたいとかなのかな?。だとクエン酸は合わないかな?
ふ活化で重要なのはとりあえずpHだな。弱酸性orアルカリ性どっちがいいかは抗原、抗体で違う。

(無題) 削除/引用
No.1359-3 - 2011/12/21 (水) 11:24:05 - 組織
EDTAとかpHが高い液は剥がれやすいです。
私の場合はMASより接着性の高いコートグラスを使えば大丈夫でした。
松浪硝子のフロンティアやプラチナを使ってます。価格はMASと同じです。

経験的には,EDTA>クエン酸緩衝液>DWの順に抗原賦活効果が高いと感じてます。

(無題) 削除/引用
No.1359-2 - 2011/12/21 (水) 10:07:07 - う
私もクエン酸以外でやるとはがれるので、
クエン酸が最も効果的(はがれないという意味でも)と
思っています。

EDTA 免疫染色 削除/引用
No.1359-1 - 2011/12/21 (水) 09:48:17 - 梅干し
前回EDTAにて質問させて頂いた梅干しです.
さっそく御教示頂いたプロトコールで染色をおこなったのですが,EDTA溶液に浸したビーカーにMWで賦活化をしたところ,スライドから標本が剥がれてしまいます.
MASコートスライドグラスを使用しており,クエン酸を使用した賦活化ではそのような事は起こりません.
同じような経験がある方で改善策等ありましたら.教えて頂ければ幸いです.
宜しくお願い致します.

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