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(無題) 削除/引用 No.1343-4 - 2011/12/17 (土) 04:00:57 - ab 競合ELISAの逆シグモイド曲線ですが、下記の過去のトピックが参考になると思います。 http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech3/biotechforum.cgi?mode=view;Code=1235 もし単純にデータの出力ミスであれば、実験自体は上手くできているようですので、あとは「競合ELISA　検量線」などで検索して、原理などを勉強されるとよいのではないでしょうか。 回帰曲線の式がわかれば、特別なソフトではなくExcelでも濃度計算はできると思います（確証はないですが）。

(無題) 削除/引用 No.1343-3 - 2011/12/16 (金) 10:27:12 - 初心者 abさん ありがとうございます。 上下逆にしてExcelに入力してみたら、 辻褄の合うグラフになりました。 プレートを既に廃棄してしまっているため、 本当にこれで間違いないのかということは確認ができません。 次回もう一度実験を行ってみて、 それで間違いがなければ、このまま続けようと思っています。 やはり、ソフトは必要なのですね。 正確に定量したいわけではないので、シグモイド曲線の状態でもよさそうです。 お勧めのソフトなどありましたら、教えていただけないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.1343-2 - 2011/12/16 (金) 06:39:15 - ab もしかして、結果が上下逆ではないですか？ 一番上がpositive controlで、一番下がblankであれば、結果の辻褄が合うんですけど。 グラフは、Excelでも描けますが、グラフソフトを使った方がきれいにできます。 kitの性能上、20-300 pgが直線（logで）になるようなので、その範囲で検量線を描きます。 直線にしたい場合は、10 pg、100 pgと1000 pgくらいしか使えないので、この範囲の点をもっと測定しないといけません。 この範囲でx軸のみ対数をとってからグラフを描くと直線のグラフになります。 検量線を用いて、蛍光強度から濃度を計算する場合は、x軸とy軸を逆にしてグラフを描けばよいです。 もし、直線にならない範囲で検量線を描くのであれば、グラフソフトを使用した方が無難でしょう（シグモイド曲線になります）。

ELISA 蛍光法 削除/引用 No.1343-1 - 2011/12/15 (木) 15:23:07 - 初心者 前回の投稿トピック→ http://www.kenkyuu2.net/cgi-biotech2011/biotechforum.cgi?mode=view;Code=1276 先日いただいたアドバイスを踏まえて、 アスピレーターを使用せずにwashを行いました。 （bufferのみの場合は、勢いよく流しに捨て、吸水紙の上で逆さにし叩きつ　けて水気を切る） これにより、前回投稿した時よりは濃度依存的な部分が出来てきました。 と言っても、Blankが異常に高い現状は変わっていませんし、 あまり状況は進展していないのですが。 プレートリーダーの設定と結果は以下の通りです。 　Mode：Fluorescence Top Reading　　　　　　 　Excitation Wavelength：325nm 　Emission Wavelength：420nm　　　　　　 　Excitation Bandwidth：9nm 　Emission Bandwidth：20nm 　Gain：87(Optimal） 　Number of Reads：25 　Integration Time：20μs 　Lag Time：0μs 　Settle Time：0ms 　Part of Plate：A6-H7 　Start Time：15:11:31 　End Time：15:11:48 Blank　 23100 　24072 Total Binding5161 7788 1pg/ml 7332 8576 10pg/ml 19441 21477 100pg/ml 34710 34230 1000pg/ml 35380 40676 10000pg/ml 35247 34334 Positive Control3141 2770 企業のテクニカルにも、使用したプロトコルと結果を添付してメールをしました。 これでまた少しでも先に進めたら、と考えています。 ここからが本題なのですが、（前置きが長くて申し訳ありません。） Kitに添付されていたグラフでは、peptide濃度が上がるにつれて蛍光が下がるグラフなのですが、 今回の結果を見ると、peptide濃度が上がるにつれて蛍光も上がるグラフになります。 今まで行った他の実験では、測定したデータがそのままグラフに出力できるソフトを使用していたのですが、 今回の蛍光法では、共同利用のプレートリーダーを利用しているので、 読み取ったデータのみ保存できて、解析は別になっています。 いろいろなサイトや本、このフォーラムなどで勉強しているのですが、 なかなかどうやってグラフにしたらいいのかがわかりません。 考えるヒントだけでもいいので、アドバイスをいただけたらと思います。 よろしくお願いいたします。

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