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(無題) 削除/引用 No.134-5 - 2011/03/17 (木) 13:19:46 - 組織 コメントありがとうございます。 マスターミックスは1種類しか使ったことがなかったので、サンプルがもらえそうなら検討してみます。 ただ今はすぐにもらえないかもですね。特にABIとか。

(無題) 削除/引用 No.134-4 - 2011/03/17 (木) 11:46:18 - ンンノ ご報告ありがとうございます。 とても妥当な結果ですね。 参考になります。 ご存知かもしれませんが、各社から発売されている定量PCR用酵素液は TaqMan濃度の推奨至適濃度が2倍程度違うものがあります。 掛かり方も結構様々で何でもよく増えるものや特異性に優れる物などが あります。 酵素液の実売価も結構違いますので、コストが実験計画に影響するよう な場合には検討の価値があるかと思います。

(無題) 削除/引用 No.134-3 - 2011/03/16 (水) 12:29:20 - 組織 ご指摘ありがとうございます。大変参考になります。 予備実験で、beta-actinを使って、メーカー推奨の2.5倍、5倍に希釈してみましたが、立ち上がりがそれぞれ1~2サイクル、3~4サイクルと遅れ、蛍光曲線のピークの高さも濃度依存的に下がりました（これは当たり前ですが）。 コントロール遺伝子でこの結果なので、発現量の低い遺伝子をアッセイするのは厳しいと判断して、プロトコール通りやることにしました。 ものは試しでやってみたんですが、やはり最適化されてる条件を変えるのは得策でないという経験になりました。

(無題) 削除/引用 No.134-2 - 2011/03/11 (金) 10:56:22 - ンンノ メーカー関係者ではありませんが、プローブを薄めて使うのはおすすめできません。 ものによって実験再現性が悪くなります。 比較的少数の遺伝子について、非常に多数の検体を測定するんでしたらコストを さげる方向で最適化することに意味はあると思いますが、そうでなければ余計 な実験をするぶんだけ、時間と費用の無駄になります。 酵素液をABI純正から変えるほうがリスクが小さくてコストダウンにも有効と 思いますが、無料試供品がもらえるといいですね。

Taqmanプローブの節約 削除/引用 No.134-1 - 2011/03/09 (水) 10:55:55 - 組織 ABIのTaqMan Gene Expression Assaysはストックが20xで提供されていますが、20倍希釈より少ない量でも使えますか？ 今回初めてTaqmanを使いますが、SYBRと比べてコストが高いので、できればコストダウンをはかりたいです。もしご経験があれば教えてください。 とりあえず20倍、50倍、100倍くらい濃度をふって予備実験してみます。

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