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MpvEznjyXyE 削除/引用 No.1330-6 - 2012/03/02 (金) 03:02:16 - wvltovkuldd x3Zv6U <a href="http://vyzetfkwlmxb.com/">vyzetfkwlmxb</a>

UHKzfNcQeeWavMvHA 削除/引用 No.1330-5 - 2012/02/28 (火) 17:13:41 - tdwinx 8k0iz4 <a href="http://zfafsbvxstgw.com/">zfafsbvxstgw</a>

DglYMiLKNYCEYL 削除/引用 No.1330-4 - 2012/02/28 (火) 15:57:14 - Itsuki We need a lot more insghits like this!

(無題) 削除/引用 No.1330-3 - 2011/12/13 (火) 22:57:08 - うさこ そうですよね。 過剰な高濃度はやはり気を付けた方がいいですよね。 やはり抗体を勿体ぶらずにたくさん使った方がよいかもですね。

(無題) 削除/引用 No.1330-2 - 2011/12/13 (火) 15:14:38 - み 培養細胞を適当なバッファーで溶解させる以上、細胞volumeに対して最低でも5倍以上のvolumeがないと可溶化されるべき蛋白が不溶化画分にいくと思います。 そのような状態ではまずいでしょうから、結局、高濃度にしようと思ってもせいぜい5m/mくらいが限度のような気がします。 勿論、組織なら界面活性剤の種類と可溶化volumeによりますが10-15m/mは可能です。 100%の沈降を目指しておられますが、それは抗体の質とモル数による部分が大きいのでは？ 高濃度の蛋白ライセ―トでrotationすると物理的な力で変性してくる蛋白の割合が大きくなる印象があり、僕の場合1-2m/mで沈降させます。

免疫沈降に使用するライセートのタンパク質濃度 削除/引用 No.1330-1 - 2011/12/13 (火) 14:50:26 - うさこ 免疫沈降を行い内在性目的タンパク質に結合するタンパク質を銀染色で同定したいとトライしております。 ライセートのトータルタンパク質濃度が高いほうが抗体との結合が増えることになると思いますが、培養細胞を溶解して（1.0% Triton入りのリシスバッファーで核は遠心でのぞきます）どのくらい高い濃度のライセートが限度になるのでしょうか？ 現在はタンパク質濃度が2 ug/ulで行っています。かなり高い濃度で行っている方がおりましたら、どのくらいの濃度で行っているのかご教授お願います。 もちろん非特異が増えることは覚悟の上です。まずは目的タンパク質をライセートから100％に近いぐらい免疫沈降できればと考えております。 それとも高濃度のライセートは避けるべきでしょうか？

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