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(無題) 削除/引用 No.1329-3 - 2011/12/16 (金) 12:25:10 - ｡ﾟ(ﾟ´Д｀ﾟ)ﾟ｡ ご返答ありがとうございます。 返事が遅くなってしまい申し訳ありませんでした。 現在、頂いたプロトコルを試しているところです。 疑問なのがありまして、下記のどちらを行う方法なのでしょうか。 ・PFAによる発色の誘発の抑制 ・PFAによる二次抗体の非特異的結合の抑制 ご存知でしたら宜しくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.1329-2 - 2011/12/13 (火) 16:25:34 - AP http://www.uhnresearch.ca/facilities/wcif/PDF/Autofluorescence.pdf

免疫染色：パラホルムアルデヒド固定での自家発光！？ 削除/引用 No.1329-1 - 2011/12/13 (火) 14:47:24 - ｡ﾟ(ﾟ´Д｀ﾟ)ﾟ｡ 免疫染色の初心者です。 組織固定後、凍結切片を作成しTexasred用のフィルタで観察すると、 抗体未反応であるのに発色が見られました。 未固定のサンプルでは発色していないので、 パラホルムアルデヒドが原因か！？と考えています。 塩化アンモニウムでの処理もあるようですが、 これは抗体との反応を防ぐ方法なのかと。。。 どのような回避方法があるのか、ご存知のかたいらっしゃいましたら宜しくお願い致します。 現在の固定方法は下記の通りです。 4%パラホルムアルデヒド　4℃ O/N PBS洗浄 すぐにOCTで包埋・凍結切片作成 ---8%パラホルムアルデヒド--- ・粉末＋蒸留水、約60℃の湯に浸して振る　約10min ・1mol/L KClを約50μl加えつつ攪拌 ・約60℃の湯に浸して振る　約10min ・4℃保存（1週間以内） ・使用時にPBSで4%に希釈

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