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(無題) 削除/引用 No.1324-3 - 2011/12/12 (月) 14:32:37 - ~ キットの説明書をきちんと読んでいませんが、おそらくはインターカレーターで二重鎖の中に入った蛍光物質を定量するのでしょうか。 >サンプルDNAは二本鎖に戻っていると考えています。 短い配列(十数〜数十bp)であれば、ゆっくり室温に戻すと一部（または多く）は二本鎖に戻ります。ただ、残りは二重鎖にはならないものがあります。 48kbもあるλDNAでは、二重鎖になる部分はより少ないでしょう。 吸光度で濃度を調べるにしても、吸光係数は 1 OD260 Unit = 50µg/ml for double-stranded DNA 1 OD260 Unit = 35µg/ml for single-stranded DNA 位です。 Single, double strandが混ざっている今回のDNAではこの中間の値となっているので、吸光度で調べるのも無理があるでしょう。 フィールドインバージョンゲル電気泳動等で46kbの位置に来るバンドを定量した場合でも、一部が二重鎖になっていないものは含まれるでしょう。 目的が何か分かりませんが、始めに入れたDNA量でコントロールするのが一番楽かと思います。

(無題) 削除/引用 No.1324-2 - 2011/12/12 (月) 13:48:22 - ｔｔｔ 2本鎖DNAを加熱して急冷すると（ゆっくり冷やしても？）、一部は一本鎖になってしまう、とどこかで読んだことがあります そのせいじゃないでしょうか

DNAの定量 削除/引用 No.1324-1 - 2011/12/12 (月) 13:24:58 - NN invitrogen社のQuant-IT PicoGreen dsDNA Reagent and Kitsを用いて，二本鎖DNAの定量をしております。サンプル溶液はピュアなLamda DNA溶液です。実験操作の中で95℃で10分間サンプル溶液を加熱する処理があるのですが，加熱処理をしない場合はDNAが定量できますが，加熱処理するとDNAが定量できません(加熱処理をしないと定量できます)。このKitは二本鎖DNAしか測定できません。加熱によってDNAは一本鎖に解離すると思うのですが，その後室温に戻してから測定はしているため，サンプルDNAは二本鎖に戻っていると考えています。なぜDNAが測定できないのかわかりません。アドバイスよろしくお願いします。

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