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SSEA3抗体 トピック削除
No.1323-TOPIC - 2011/12/12 (月) 11:38:41 - a
iPS細胞の未分化を免染で確認したいのですが、
SSEA3の抗体がどうしても染まりません。
いい抗体を知っている方、教えてください。
よろしくお願いいたします。
 
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(無題) 削除/引用
No.1323-10 - 2011/12/15 (木) 02:54:16 - Rat
SSEA3抗体は、Rat IgMですが、
2次抗体は適したものを使っているでしょうか?

http://dshb.biology.uiowa.edu/MC-631-SSEA-3

モノクロ抗体で、よく古くから使われている抗体ですので、
メーカーを変えても、この抗体に関しては、結果は変わらないと思います。

まあ、手元にある抗体が何らかのコンタミなどにより、
失活している場合は話は別ですが。

(無題) 削除/引用
No.1323-9 - 2011/12/13 (火) 20:48:03 - a
4%PEA 4℃20min
5%DS-PBT RT 30min
1次抗体
です。

(無題) 削除/引用
No.1323-8 - 2011/12/13 (火) 18:56:19 - ami
>5%Donkey serum+PBTで固定している

PBTというのはPBSに界面活性剤を加えたもので、固定作用はないかと思いますが、
細胞の固定は何で行われていますか?

(無題) 削除/引用
No.1323-7 - 2011/12/13 (火) 16:24:18 - a
5%Donkey serum+PBTで固定している場合も
脂質がぬけることが多いと考えられますか?

(無題) 削除/引用
No.1323-4 - 2011/12/13 (火) 11:48:20 - ami
SSEA3抗原は糖脂質上の糖鎖を認識しています。
そのため細胞の固定にメタノールやエタノール、アセトン等を用いると細胞膜から脂質が抜け落ちる場合が多いです。

そのため4% PFAで固定したものを染色しております。

(無題) 削除/引用
No.1323-3 - 2011/12/12 (月) 23:45:00 - a
ヒトのipsです。

(無題) 削除/引用
No.1323-2 - 2011/12/12 (月) 19:19:44 - ami
ヒトのiPSですよね?

SSEA3抗体 削除/引用
No.1323-1 - 2011/12/12 (月) 11:38:41 - a
iPS細胞の未分化を免染で確認したいのですが、
SSEA3の抗体がどうしても染まりません。
いい抗体を知っている方、教えてください。
よろしくお願いいたします。

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