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(無題) 削除/引用 No.1322-3 - 2011/12/12 (月) 21:42:34 - Harmonia 同じ向きに２個インサートが入ったとか、表−裏−表と、３個入ったとか？ 具体的に操作内容を精査しないと、なんともいえません。

(無題) 削除/引用 No.1322-2 - 2011/12/12 (月) 08:48:27 - ~ 起きているのが1回だけならば、プロモーター等に変異が入ったものを拾ってきてしまったのかもしれません。 ORF部分が完全でも、発現に必要な配列が壊れていれば、発現しなくてもおかしくは無いでしょう。

cloning 削除/引用 No.1322-1 - 2011/12/12 (月) 08:27:14 - cloning クローニングに関して、ご意見をいただければと思い投稿です。いままで経験したことのない不可解な問題に直面しております。細胞から目的とする遺伝子のｍRNAを抽出しCDNAを合成し（または譲り受けたプラスミドをテンプレートとして）、PCR産物(挿入予定のプラスミドのMCS内にある制限酵素シークエンスを両端に持つもの）をﾗｲゲートし、それをシークエンスにおくりエラーのないことを確認するといった、非常に基本的な、ことなのですが発現(flag　tag）がまったくみられません。しかしインサートの部分を同じ制限酵素でダイジェストして、新たにPrepしたおなじヴェクターに入れ替えると発現が見られます。とってそのプロテインの安定性ですとか、フレームの問題ではないと思います。このような奇妙な経験おありのかたがいらっしゃいましたら、解説していただけると幸いです。新しいテクニシャンがきてからこのようなことが怒り始めましたが、その人と一緒にトラブルシューティングをしているのですが、まったく気がつくことがありません。

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