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凍結臓器からのミトコンドリア単離 トピック削除
No.1312-TOPIC - 2011/12/09 (金) 12:20:07 - マイトコンドリアン
マウス肝臓からミトコンドリアを単離することを計画しています。
そこで質問があります。
マウス肝臓は採材後液体窒素で凍結させて-80℃で保存していたのですが、この肝臓からミトコンドリアは単離できるのでしょうか?
なんとなくミトコンドリアは凍結融解によって膜構造が壊れてしまい、適切な比重で単離できないのではないか?と考えています。
ちなみにミトコンドリアの単離は超遠心ではなく、キットを使う予定です。
ご教示をよろしくお願い致します。
 
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(無題) 削除/引用
No.1312-2 - 2011/12/10 (土) 13:15:16 - aji
とりあえず、単離操作を行えば、ミトコンドリアと呼べるものは取れますよ。インタクトなミトコンドリアは取れませんが。興味のある機能やタンパクが膜だけのものであれば、それでも使えますけど、マトリックス内のタンパクは減るでしょう。まったく取れないわけでもないです。

ちなみに超遠心しないというのは密度勾配はかけないという意味でしょうか。それなら比重が変わっても関係ないと思いますけど。

界面活性剤の入ったキットは使ったことがないので、そのタイプなら訳分からないものが取れるかもしれませんね。界面活性剤無しのものであれば、キットという名の普通のバッファーを買うわけですね。リッチだなー。

凍結したサンプルを使って論文にする時にはその旨を必ず書いてくださいね。雑誌によっては問答無用でリジェクトしてくれます。

凍結臓器からのミトコンドリア単離 削除/引用
No.1312-1 - 2011/12/09 (金) 12:20:07 - マイトコンドリアン
マウス肝臓からミトコンドリアを単離することを計画しています。
そこで質問があります。
マウス肝臓は採材後液体窒素で凍結させて-80℃で保存していたのですが、この肝臓からミトコンドリアは単離できるのでしょうか?
なんとなくミトコンドリアは凍結融解によって膜構造が壊れてしまい、適切な比重で単離できないのではないか?と考えています。
ちなみにミトコンドリアの単離は超遠心ではなく、キットを使う予定です。
ご教示をよろしくお願い致します。

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