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思うに 削除/引用 No.1222-9 - 2011/11/17 (木) 18:36:41 - ema >emaさん 倍以上ののLB/(ampとか）等を加えて薄めといて置いてみる overgrowthで駄目だった場合にはこれで解決します。 >~さん プレートに垂らしておくと、2週間くらいは持ちます。 （プラスミドがおかしくなることがあるのでお勧めしませんが） 全部が目的の大腸菌って訳じゃないので通常プレートにコロニーがでるのは数えれる範囲になってますよね。 セレクトがかかった大量の生菌をたらすといっぱい過ぎて小さなコロニーが形成されますし、その周辺は抗生剤が消費され濃度が極端に低くなるので回復用につついた中にサテライト（耐抗生剤の菌ではないもの）が混じってしまうことはあります。 >？さん プラスミド上の遺伝子発現が効率が非常に高い場合、大腸菌を殺すことがあるので、私はそのつど一回限りの形質転換をします。 今回大腸菌に遺伝子を入れたような行為です。

自助努力も必要かと 削除/引用 No.1222-8 - 2011/11/17 (木) 08:40:48 - たろう 「形質転換」とか、基本的な言葉ぐらいは、実験書にあたるなりgoogleで引くなりしましょうよ。 http://www.google.co.jp/search?gcx=c&sourceid=chrome&ie=UTF-8&q=%E5%A4%A7%E8%85%B8%E8%8F%8C%E3%80%80%E5%BD%A2%E8%B3%AA%E8%BB%A2%E6%8F%9B

投稿者です 削除/引用 No.1222-7 - 2011/11/16 (水) 21:34:05 - kazuo >中年さん 別の原因とは具体的に何が考えられるのでしょうか？ 大変申し訳ありませんがご教授ください。よろしくお願い致します。

投稿者です。 削除/引用 No.1222-6 - 2011/11/16 (水) 21:32:23 - kazuo 皆さま、アドバイスありがとうございます。 >emaさん 倍以上ののLB/(ampとか）等を加えて薄めといて置いてみる これは、理論的(原理的？)にはどのような意味があるのでしょうか？ >~さん プレートに垂らしておくと、2週間くらいは持ちます。 （プラスミドがおかしくなることがあるのでお勧めしませんが） これは、なぜプラスミドがおかしくなるのでしょうか？個人的なご経験のことでしょうか？ プラスミドを大腸菌にトランスフォームしてプレートに大腸菌を生やすことはよくやりますが、プラスミドがおかしくなるという話は聞いたことがなかったもので・・・ >？さん プラスミド上の遺伝子発現が効率が非常に高い場合、大腸菌を殺すことがあるので、私はそのつど一回限りの形質転換をします。 形質転換とは具体的にどのようなことをするのでしょうか？勉強不足な質問ですみません。 再度の基本的な質問で大変申し訳ありませんが、ご教授よろしくお願い致します。

(無題) 削除/引用 No.1222-5 - 2011/11/16 (水) 21:11:12 - 中年 ４℃での保存が良いかどうかは別として、まるで増えないということは大腸菌が全滅だったってことですよね。それは普通にはまずあり得ないことだと思います。何か別の原因も疑った方が良いのでは？

(無題) 削除/引用 No.1222-4 - 2011/11/16 (水) 21:07:23 - ？ 大腸菌にストレスがかかるプラスミドとの組み合わせ、そうでない組み合わせで、当然ながら違います。 プラスミド上の遺伝子発現が効率が非常に高い場合、大腸菌を殺すことがあるので、私はそのつど一回限りの形質転換をします。 たとえば、ストレスがかからないプラスミドとの組み合わせ（ヒト発現ベクターなど）であったのなら、何かの基本的ミスの可能性が高いでしょう。

(無題) 削除/引用 No.1222-3 - 2011/11/16 (水) 20:49:59 - ~ 土日を越えても生きていたことはあります。 ただ、今回、2日で死んだ以上は、今のやり方での保存期間は1日以下にするというのが結論になるのではないでしょうか。 emaさんの書かれている方法以外では、プレートに垂らしておくと、2週間くらいは持ちます。 （プラスミドがおかしくなることがあるのでお勧めしませんが）

生きてる事も 削除/引用 No.1222-2 - 2011/11/16 (水) 18:35:25 - ema 生きてる事も有るんだけど そうゆう時はちょっと手間＋アルファだけど ＊倍以上ののLB/(ampとか）等を加えて薄めといて置いてみる ＊グリセロールストックで-20℃におく だと生きてるんじゃないでしょうか。

大腸菌の生存期間 削除/引用 No.1222-1 - 2011/11/16 (水) 18:03:27 - kazuo いつも勉強させていただいています。 表題の件についてなのですが、 LB培地でliquid cultureしている大腸菌は、そのまま4℃に入れておくと何日ほど持つのでしょうか？ 具体的には、2 ccでcultureした大腸菌を1 ccだけミニプレップし、残りの1 ccは4℃にそのまま保管していました。諸事情あり2日後に、その保管していた大腸菌にさらにLB培地(液体)を足して増やそうとしたところ、増えません。 時間がたちすぎて死んでしまったということなのでしょうが、liquid cultureの大腸菌は4℃で何日くらい持つものか、ご存知の方がいらっしゃいましたらご教授いただけると幸いです。 ちなみに当方は、一日くらいならよく4℃で保管します。(今回は諸事情により2日保管したところ、増えなかった次第です) よろしくお願い致します。

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