BioTechnicalフォーラム [微生物の生化学的評価]

微生物の生化学的評価

No.1196-TOPIC - 2011/11/09 (水) 18:14:35 - RTRT

・寒天培地上のグラム陰性菌に対しレーザーなどを作用させております。作用後、その微生物の活性がなくなっている状態、あるいは微生物がダメージをうけている状態を生化学的検査にて定量化する方法は何か確立されているのでしょうか？

ちなみに微生物がダメージをうけると菌体内成分が流出すると仮定してLSPを定量しようと思っております。

恐れ入りますが、御教授いただけないでしょうか？
　

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No.1196-8 - 2011/11/23 (水) 16:42:11 - 月詠

ＬＰＳ（リポ多糖/内毒素）は菌体の一番外側の構造である細胞外膜の構成成分ですので、当該レーザー処理により菌体表層が破壊されて細胞外膜成分が遊離してくるなら、有意に増加すると思います
ＬＰＳのうち内毒素活性部位にあたるリピドＡ部分を特異的に測定する方法として
リムルステストなどが確立されています

細胞膜透過性の亢進による細胞の生死判定をする試薬としては、
Invitrogen社（旧Molecular Probeブランド）等から、
２種類の蛍光色素を組み合わせた判定試薬キットなどが販売されています

トリパンブルーによる色素排除試験に生死判定を、原核細胞で実施するのは、
あまり現実的ではないと思います
（通常の明視野光学顕微鏡下では固定・染色しなければ観察しにくいですので）

ただ趣旨からすると、要するにレーザー処理後の菌の生死を判定できればなんでもよい
ようにも思えるのですけど、生化学的検査でなければならないのでしょうか
（単純に新しい培地に接種して生育してくるか検査するだけで十分なように
思うのですけど…）　

(無題)

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No.1196-7 - 2011/11/10 (木) 21:06:15 - Harmonia

フローサイトメーターによる細胞の生死判定
http://www.bdj.co.jp/reagent/articles/1f3pro00000rsv7j.html

TO ( thiazole orange ) , PI ( propidium iodide ) の2種類の色素を使います。大腸菌では使えます。

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No.1196-6 - 2011/11/10 (木) 13:33:58 - mon

trypan blueはDNA結合色素ではありません。念のため。
培養細胞だと、0.5～1%trypan blue生理食塩溶液に懸濁すると、死細胞は細胞質全体がの濃青に染まりますが、生細胞は染まりません（青い背景に白抜けするように見える）

(無題)

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No.1196-5 - 2011/11/10 (木) 13:19:08 - RTRT

LSP→LPSのスペルミスでした。御指摘恐れ入ります。

ATPのルシフェラーゼ定量やDNA結合色素の微生物への応用という事ですね。
アドバイスありがとうございます、論文検索していきたいと思います。

御教授ありがとうございました。

(無題)

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No.1196-4 - 2011/11/09 (水) 22:50:49 - う

×LSP

○LPS