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(無題) 削除/引用 No.1179-9 - 2011/11/27 (日) 00:12:41 - Jay 結果ご報告が遅れましてすみません。ディッシュに少し角度をつけて細胞を 集めるとうまくいきました。培養液の交換を５:５として遠心しないようにしたのも結果がよかった要因と思います。組織培養学会の質問箱というのは知りませんでした。皆さまありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1179-8 - 2011/11/09 (水) 02:12:08 - ab 樹立した方（恵美宣彦先生でしょうか？）やその細胞を分譲してくれた機関に聞くのが一番だと思いますが。 培養関連なので組織培養学会の質問箱で聞いてみるのもよいと思います。 <http://jtca.dokkyomed.ac.jp/JTCA/QA/index-SA.html>

(無題) 削除/引用 No.1179-7 - 2011/11/08 (火) 23:27:36 - う その細胞は、JurkutやK562と同じようにtumorousな細胞なんですかね？

(無題) 削除/引用 No.1179-6 - 2011/11/08 (火) 22:36:47 - Jay 皆さま ありがとうございます。 ２４wellで遠心なしで培養液の交換の比率をいくつか変えてやってみました。 ７：３〜５：５であまり違いなし。 細胞がwellの底に互いに接着している部分の細胞が見た感じ元気がよさそうです。細胞の密度が高くても離れ離れになっている場合は駄目になりそうな印象を 受けます。プレートに少し角度をつけて培養してみることにしました。 また結果をご報告します。

(無題) 削除/引用 No.1179-5 - 2011/11/06 (日) 17:47:49 - ~ NK細胞は厚かったことがありませんが、 浮遊の細胞の場合、遠心に弱い細胞と強い細胞がいます。 もし、書かれている培養液の交換というのが遠心を含む操作であれば、 遠心をしないで、沈んだ細胞を吸わないように培養上清を抜き取り、新しい培地を入れたほうが生存率が向上するかもしれません。

(無題) 削除/引用 No.1179-4 - 2011/11/06 (日) 13:04:43 - MP 増えにくい浮遊系細胞の場合、フラスコよりも24 well plate 等で培養するほうが、細胞の状態がよくなることがあります。理由はわかりませんが、ご参考まで。

(無題) 削除/引用 No.1179-3 - 2011/11/06 (日) 10:59:46 - Jay ありがとうございます。 私は浮遊系細胞の培養はJurkat, K562ぐらいしかないのです。どちらも簡単にばいようできて培養液の交換は9:1で問題になることはなかったので今回も同様にやっていました。 細胞密度ばかりに気をとられていました。fresh mediumの比率についても検討してみます。

(無題) 削除/引用 No.1179-2 - 2011/11/05 (土) 20:22:02 - う >さすがにもう増えすぎだろうと思って培養液を交換してフラスコを倒して この培養液を交換して、というのは100 % freshなものに置き換えるということでしょうか？ 免疫系の細胞、特に浮遊細胞だとcell-cell interactionが接着系の細胞に比べて少ないので、サイトカインなどの因子に大きくサバイバルが依存すると聴いたことがあります。 私はNK細胞のラインではないですが、浮遊系の細胞の培養の段階で同じように苦労していました。 私の場合、100 % 新しい培地に丸ごと変えるのではなく、50%とか少しずつ変えて行くように心がけました。 T細胞やNK細胞だと培養液に含まれる因子以外に、自分自身が出すサイトカインもその生存や増殖に大事です。IL-2やIL-15なんかがそうですよね。そういったhomeostaticなサイトカインがいい具合に沢山たまった頃に培地が全部新しいものに変わってしまうと・・・死んでしまってもおかしくはないかな？と思います。 投稿者様が培地は少しずつ変えて行っているのであれば、IL-2やIL-15などのサイトカインを培地に加えるってのもありかとおもいます。

NK細胞の培養 削除/引用 No.1179-1 - 2011/11/04 (金) 21:14:31 - Jay NK cell lineの培養がうまくいかなくて困っています。JCRBから入手した MTAというcell lineを試したのですが、１週間ほどで死滅してしまいます。 NK　cell lineは最初は細胞を密集させたほうが良いと聞いたのでフラスコをたてて培養すると最初の３日間ぐらいはうまく増えてフラスコの底にたまるのですが、さすがにもう増えすぎだろうと思って培養液を交換してフラスコを倒して みると（5x10^5くらい）翌日にはもう死に初めていたので再度フラスコを立てたのですがだめでした。 色々な条件で試すべきなのはわかっていますが、時間がなくてあせっています。 どなたかよいプロトコールをご存知でしたらお教えいただけないでしょうか？ 他のNK cell lineの培養のプロトコールでも大変助かります。よろしくお願いします。

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