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(無題) 削除/引用 No.1147-4 - 2011/10/29 (土) 14:51:55 - Harmonia まずは、正確な記述を心がけるべきです。 3 ug/ul のプラスミドDNAだと、電気泳動上でゲノムのコンタミが確認できなくても粘性があるように思えることもあり、そうでもないこともあり。 濃度と感覚的な粘性は、議論しにくいです。 ゲノムのコンタミを疑うなら、酵素切断無しに電気泳動しては同でしょうか？ また、数値だけから議論するなら、200 ml培養から総量何マイクログラムのDNAが取れたか？もちろん、プラスミドの大腸菌でのコピー数が無いと多いか少ないか議論できないので、プラスミドの複製オリジンは何かも必要です。 僕なら、菌で保存するなら、ライシス前に菌を懸濁し、冷凍庫保存します。

(無題) 削除/引用 No.1147-3 - 2011/10/29 (土) 10:38:08 - 774 ＞OD600が６くらいのときに 高すぎませんか？

(無題) 削除/引用 No.1147-2 - 2011/10/29 (土) 09:40:58 - もくもくさん 大腸菌は4℃で放置すると少なからず溶菌します。 培養後、すぐにプラ抽できないときは培養液を 遠心して液体を除き、菌体だけを冷凍保存する といいかも。

４度保存した菌液からプラスミド抽出 削除/引用 No.1147-1 - 2011/10/29 (土) 00:11:52 - いーこり 実験初心者です。 最近、キットを使ってラージスケールで大腸菌からプラスミドを抽出しました。 しかし、回収したプラスミドの粘度が異様に高く（とろとろ）（濃度は３マイクログラム／マイクロ　くらいでした）ゲノムDNAがコンタミしたのではないかと思います。 ライシスの後中和までの時間や、混ぜ方（５ー１０回ほどインバート）には、 そんなに問題があるとは思えません。 前培養した菌液２００マイクロを、本培養の培地２００ミリリットルに加えました。 その後、１６時間培養して、OD600が６くらいのときに ４度に保存して、２日後にプラスミドを回収しました。 この４度保存が、ゲノムのコンタミネーションの原因でしょうか？ あまり考えられる原因がないのですが、なにか参考になることがあれば教えてください。

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