Bio Technical フォーラム

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No.1127-TOPIC - 2011/10/26 (水) 10:56:49 - Okara
Western初心者です。

Insulin Receptorの同定を行おうと思い、下記のgelとbufferを用いて実施した所、全てのLaneが一様に繋がった様な泳動像になってしまいました。何分初めて実施している為、原因と解決法が思い浮かびません。
この様な現象の考えられる原因や解決法をご存知の方、教えていただけると幸いです。宜しくお願いします。

■Gel:3-8％Tris-Acetate(市販)
■buffer：Tris-Acetate SDS runningbuffer
　
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もっと条件を教えてください。 削除/引用
No.1127-2 - 2011/10/26 (水) 15:51:04 - mon
Tris-Acetateだと、Invitrogen社のNuPAGE でしょうか。あまり一般的でないので、どのような操作をしたのでしょうか。具体的に教えてください。
例えば：試料の調製法(サンプルバッファー組成も含めて）、電気泳動条件(自作ならrunning buffer組成も)、染色法
バンドにならずにスメアー状態ということかな？
電気泳動する前の試料は粘ついていましたか？DNAが剪断されていないと粘つきますし、スメアーになりやすいです。

SDS PAGE 削除/引用
No.1127-1 - 2011/10/26 (水) 10:56:49 - Okara
Western初心者です。

Insulin Receptorの同定を行おうと思い、下記のgelとbufferを用いて実施した所、全てのLaneが一様に繋がった様な泳動像になってしまいました。何分初めて実施している為、原因と解決法が思い浮かびません。
この様な現象の考えられる原因や解決法をご存知の方、教えていただけると幸いです。宜しくお願いします。

■Gel:3-8％Tris-Acetate(市販)
■buffer：Tris-Acetate SDS runningbuffer
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