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ありがとうございました 削除/引用 No.1126-4 - 2011/10/28 (金) 11:46:46 - Lee PYK, MPさま ご回答ありがとうございました。 リポフェクションでも大丈夫なのですね。 私が調べた文献がたまたまレトロウィルスを使ったのもばかりだったようです。 あとは、私の実験目的との兼ね合いになりますが、とりあえずは長期の発現を目的とはしていないので、試薬でやってみようと思います。 どうもありがとうございました。

(無題) 削除/引用 No.1126-3 - 2011/10/28 (金) 07:58:28 - MP 実験の内容にもよるかと思います。 一過性発現だけでよいのであれば、通常の試薬を用いれば問題ないです。 ただ安定発現させる場合は、レトロウイルスがベターでしょう。 もちろんトランスフェクションで薬剤耐性株をとることも可能ですが、かなり選択がかかってしまう可能性は否めません。 レトロ使用に関しては、rodentの細胞であればecotropicのウイルスを使えば問題ないわけで。でももしヒトの細胞ということであれば、Rasのウイルスを扱うのは確かに気持ち悪いですね。Ecoのレセプターをあらかじめ発現させておくという手もなくはないですが、、、。

(無題) 削除/引用 No.1126-2 - 2011/10/26 (水) 12:31:09 - PYK 私はHeLaやCOSといった細胞株にFuGeneHDでtransfecetionしていますが、問題ないように見えます。TagをHA-tagやGFP-tagに変えても良好な結果が得られていますので大丈夫じゃないでしょうか？論文も普通のリポフェクションを行っているものも多く見受けられますし。

H-Ras V12の発現について 削除/引用 No.1126-1 - 2011/10/26 (水) 09:21:55 - Lee ほ乳類細胞に活性型Rasを過剰発現させなくてはなりません。 いくつか文献を読むとH-RasV12の過剰発現はウィルスベクターを用いて行っている場合が多いようなのですが、一般的なトランスフェクション試薬では適さないというようなことがあるのですか？ 出来ればウィルスは用いたくないものですから。 シグナル関連の実験に関してだいぶ知識不足ですので、基礎的な質問かも知れませんが、色々教えていただけると助かります。 よろしくお願いいたします。

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