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Phos-tag agarose 利用方法について トピック削除
No.1114-TOPIC - 2011/10/24 (月) 16:24:21 - SSS
Phos-tag agarose を用いてリン酸化タンパク質の濃縮・精製を検討しています。サンプルは植物細胞を用いる予定です。

そこで質問なのですが、植物からタンパク質を抽出し、Phos-tag agaroseを用いてリン酸化タンパク質を濃縮・精製した方はいらっしゃらないでしょうか?

公開されているPhos-tag agroseのプロトコルどおりで問題はないのでしょうか?

また、植物をサンプルとし、Phos-tag agaroseを用いてリン酸化タンパク質を濃縮・精製した論文をご存じの方も教えていただければ幸いです。

よろしくお願いします。

*以前のフォーラムでPhos-tagについて議論がされていましたが、植物に関しては詳しく説明がなかったようなので質問させていただきました。
 
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(無題) 削除/引用
No.1114-3 - 2011/10/26 (水) 13:32:58 - シリウス
回答がつかないようなので、回答にならない回答を少しばかり。

まず、Phos-tagのことでしたら、開発者である
広島大学の木下先生に直接ご質問されたらいかがでしょうか?

http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html

私は、Phos-tag biotinを使っていますが、とても良い試薬です。

RI不要ですし、普通の抗体と同じように使えますし。

ただ、動物細胞のwhole cell lysateを電気泳動すると、
レーン全体が真っ黒になるくらい、リン酸化タンパク質を検出します。

Phos-tag agaroseで濃縮・精製できると説明書にかいてありますが、
Phos-tagの高い結合のために、沢山のリン酸化タンパク質が
ひっかかりそうです。

Phos-tag agaroseの使用経験がないので、個人的には、
Phos-tag agaroseを使ってどのような結果が出るのか興味があります。

何かわかりましたら、教えていただけると、幸いです。

Phos-tag agarose 利用方法について 削除/引用
No.1114-1 - 2011/10/24 (月) 16:24:21 - SSS
Phos-tag agarose を用いてリン酸化タンパク質の濃縮・精製を検討しています。サンプルは植物細胞を用いる予定です。

そこで質問なのですが、植物からタンパク質を抽出し、Phos-tag agaroseを用いてリン酸化タンパク質を濃縮・精製した方はいらっしゃらないでしょうか?

公開されているPhos-tag agroseのプロトコルどおりで問題はないのでしょうか?

また、植物をサンプルとし、Phos-tag agaroseを用いてリン酸化タンパク質を濃縮・精製した論文をご存じの方も教えていただければ幸いです。

よろしくお願いします。

*以前のフォーラムでPhos-tagについて議論がされていましたが、植物に関しては詳しく説明がなかったようなので質問させていただきました。

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