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ELISA希釈液の組成 トピック削除
No.1080-TOPIC - 2011/10/18 (火) 09:34:40 -
はじめまして。

自作ELISA測定系で、血漿中のある蛋白を測定しているのですが、
その際に検体希釈時に使用するDiluentの組成について質問です。

現在、
@0.3% BSA/0.05% tween20/140mM NaCl/25mM sodium phosphate (pH7.2)の希釈液を使用して測定しておりますが、
A0.3% BSA/0.5% CHAPS/140mM NaCl/25mM sodium phosphate (pH7.2)の希釈液を誤って使用した際に@での測定値とAでの測定値で挙動が大きく変わってしまいました。この発見をもとに、それぞれの希釈液を使用して各種バリデーションを行った結果、添加回収試験、希釈直線性ともに良好な結果が得られ、いずれの希釈液を用いた両系とも目的蛋白を正確に測定できているものと考察されます。

 そこでですが、最終的にどちらの希釈液を使用した際の測定値を真の測定濃度として使用すべきか迷っています。この問題を精査する手法が何かございましたらご教示ください。
また、みなさんは血漿の希釈の際にどのような組成の希釈液を使用されているのでしょうか?併せてご教示ください。
 
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(無題) 削除/引用
No.1080-3 - 2011/10/18 (火) 12:19:29 -
mAbさん、ありがとうございます。
ご教示いただいたポイントに沿って、希釈液を選定したいと思います。

> ベストなのは論文等で多数使用されている市販キットがあれば、同一検体の相関性を見てみることです。
⇒本来なら、同一検体の相関性を見て評価したいのですが、新規項目ということもあり、市販品はございません。このようなときには、みなさんは検体の測定値というものに対しどのように解釈されているのでしょうか?たとえば、リファレンスがなければ、真の測定濃度なのか、非特異反応による偽の測定濃度なのか判断がつかないようにも思えますが。。。

(無題) 削除/引用
No.1080-2 - 2011/10/18 (火) 11:57:13 - mAb
希釈液の選定ポイントは以下で選定しています。
1)検量域(高濃度/ゼロのS/N比)
2)物質の安定性
3)%CV

2)はキャリブレーターもしくは検体を希釈し、凍結融解または加温等でモノの安定性(回収率)を算出します。

3)は界面活性剤の濃度が高いとwell間差が生じる可能性があります(固相抗体が剥がれる?)。

ベストなのは論文等で多数使用されている市販キットがあれば、同一検体の相関性を見てみることです。

ELISA希釈液の組成 削除/引用
No.1080-1 - 2011/10/18 (火) 09:34:40 -
はじめまして。

自作ELISA測定系で、血漿中のある蛋白を測定しているのですが、
その際に検体希釈時に使用するDiluentの組成について質問です。

現在、
@0.3% BSA/0.05% tween20/140mM NaCl/25mM sodium phosphate (pH7.2)の希釈液を使用して測定しておりますが、
A0.3% BSA/0.5% CHAPS/140mM NaCl/25mM sodium phosphate (pH7.2)の希釈液を誤って使用した際に@での測定値とAでの測定値で挙動が大きく変わってしまいました。この発見をもとに、それぞれの希釈液を使用して各種バリデーションを行った結果、添加回収試験、希釈直線性ともに良好な結果が得られ、いずれの希釈液を用いた両系とも目的蛋白を正確に測定できているものと考察されます。

 そこでですが、最終的にどちらの希釈液を使用した際の測定値を真の測定濃度として使用すべきか迷っています。この問題を精査する手法が何かございましたらご教示ください。
また、みなさんは血漿の希釈の際にどのような組成の希釈液を使用されているのでしょうか?併せてご教示ください。

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