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(無題) 削除/引用 No.105-6 - 2011/03/05 (土) 00:05:09 - あかね 皆さんコメントありがとうございます。 抗体を使うのは手ですね。まわりにbGal抗体を持っている人がいないか聞いてみます。 ちなみにbGalの他にいくつか一緒に染色するのでできればrabbitのbGal抗体の情報をお持ちであれば教えていただけないでしょうか？もちろんIFに使える奴です

(無題) 削除/引用 No.105-5 - 2011/03/04 (金) 23:10:58 - AA Actiasさんもアドバイスされていますが、beta-galも抗体で染色してしまうのが簡単だと思います。 私が使っているのは下記のPromegaの抗体で、マウスの脳を染めています。 http://www.promega.co.jp/Cre_Html.php?pGMPID=1309002 固定が弱いと染まりが悪いことはありますがおおむね良好に使えていますよ。

(無題) 削除/引用 No.105-4 - 2011/03/04 (金) 20:20:01 - Boston-Pullman ちなみにx-gal産物は緑や赤の蛍光はなかったと思います。青白セレクションした大腸菌で確認できるはずです。 問題は２回行う固定による抗原性の変化だと思います。抗体によるのではないでしょうか。

(無題) 削除/引用 No.105-3 - 2011/03/04 (金) 20:07:31 - Boston-Pullman ab9361 (abcam)は良さげですね。chickenなので大抵の抗体と共染色できます。ab616でknock-in mouse tissue の染色をした時は綺麗な染色像が得られませんでした。

(無題) 削除/引用 No.105-2 - 2011/03/04 (金) 08:35:11 - Actias 実験デザインに合うかどうか分かりませんが。 いっそのこと、beta-galを蛍光で検出しては？ １．抗beta-gal抗体で染めてしまう。 ２．市販されているかどうか分からないけど、Drosophila の胚の染色で、beta-galの基質の論文があります。 http://www.biotechniques.com/multimedia/archive/00010/96201rr02_10174a.pdf

beta-Gal 染色と蛍光免疫染色 削除/引用 No.105-1 - 2011/03/03 (木) 21:38:03 - あかね beta-Gal 染色と蛍光免疫染色を同じサンプルで行いたいのですが、可能でしょうか？ X-Galによる色素が蛍光染色にバックグラウンドとして邪魔にはならないかと心配しています。これまでbeta-Gal染色の経験がなく、経験のある方のご意見をお伺いしたいです。 またもしbeta-Gal染色と免疫染色が同じサンプルで可能なら、注意点等あればお願いします。 詳細は以下の通りです。 ある遺伝子がGene trap (betaGEOの挿入）されたミュータント雄マウスと野生型の雌マウスを掛け合わせ、得られるヘテロなmutant embryo (E4.5 blastocyst)を蛍光免疫染色で解析しようと思っています。50%の割合でヘテロ胚、残り50%が野生型胚が得られる予定ですが、ヘテロと野生型をbeta-Gal染色で区別し(ヘテロ胚はgene trapのgeta-geoを持つ）、その後、同じ胚をつかって蛍光免疫染色を行ないたいです。目的の遺伝子はE4.5日胚で発現しており、同様のmutant 胚でbeta-Gal染色も既に論文で報告されています。

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